益生菌干預(yù)重癥急性胰腺炎大鼠回腸差異性蛋白研究.pdf

1、目的:通過(guò)建立重癥急性胰腺炎大鼠模型，比較急性重癥胰腺炎組、益生菌干預(yù)組與假手術(shù)組大鼠腸道差異性表達(dá)蛋白，篩選特異性表達(dá)蛋白為SAP發(fā)生時(shí)腸黏膜屏障損傷機(jī)制的研究提供依據(jù)，同時(shí)也為益生菌預(yù)防及治療重癥急性胰腺炎腸粘膜屏障損傷提供新的理論依據(jù)及蛋白分子靶點(diǎn)。
　　方法:(1)54只健康8周齡雄性SD大鼠，體重250～300g，隨機(jī)分為3組;假手術(shù)組（SO組，n=18）、重癥急性胰腺炎組（SAP組，n=18）、益生菌治療組(YSJ組，

2、n=18)。(2) SO組打開腹腔并翻動(dòng)胰腺，并關(guān)腹。用3％牛磺膽酸鈉進(jìn)行SAP大鼠模型制備。YSJ組為SAP大鼠動(dòng)物建模成功待麻醉清醒后，10％益生菌溶液制劑灌胃，共給藥2次，SAP組大鼠用生理鹽水灌胃2次。(3)三組大鼠在24h時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物后取胰腺、回腸組織及大鼠腹腔靜脈血標(biāo)本。(4)胰腺和回腸組織HE染色:胰腺組織使用kusske標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理評(píng)分，觀察胰腺損傷程度;回腸組織使用改良的Chiu氏評(píng)分法評(píng)價(jià)腸粘膜損傷程度。(5)采集

3、各組回腸組織標(biāo)本，提取蛋白，進(jìn)行蛋白變性、還原及酶解，然后進(jìn)行iTRAQ標(biāo)記結(jié)合納升級(jí)反相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(nanoRPLC-MS/MS)技術(shù)對(duì)各組樣本提取的蛋白進(jìn)行鑒定及生物信息學(xué)分析。(6)數(shù)據(jù)整理分析:收集的數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，樣本均數(shù)采用方差分析假設(shè)檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;差異蛋白篩選通過(guò)R軟件采用t test計(jì)算其顯著性指數(shù)(p-Value)，分別采用p-value＜0.05且Fold chan

4、ge＞1.5或Foldchange＜0.6667進(jìn)行差異蛋白篩選。
　　結(jié)果:(1)成功制作出SAP大鼠模型，胰腺組織發(fā)生典型病理學(xué)改變。(2) SAP組和YSJ組胰腺的病理評(píng)分高于假手術(shù)組(SO組)(P＜0.05)，YSJ組胰腺病理評(píng)分低于SAP組(P＜0.05)。(3) SAP組在回腸組織的病理評(píng)分高于SO組(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。YSJ組的病理評(píng)分低于SAP組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);(

5、4) SAP組和YSJ組D-乳酸及內(nèi)毒素均高于假手術(shù)組(SO組)(P＜0.05)，YSJ組D-乳酸及內(nèi)毒素均低于SAP組(P＜0.05)。(5) SAP組與SO組間共篩選37個(gè)顯著差異蛋白，6個(gè)蛋白質(zhì)上調(diào)，31個(gè)蛋白質(zhì)下調(diào);YSJ組與SO組間共篩選出94個(gè)差異蛋白，6個(gè)蛋白質(zhì)上調(diào)，88個(gè)蛋白質(zhì)下調(diào);在YSJ組與SAP組共同存在7個(gè)差異蛋白，分別為閉鎖小帶蛋白1(ZO-1)、腸粘液素樣蛋白(Intestinal mucin-like pr

6、otein)、伴侶蛋白10(Chaperonin10)、胞漿型磷脂酶A2(Cytosolic phospholipaseA2)、結(jié)蛋白(Desmin)、腸凝集素1(Intelectin1)、轉(zhuǎn)膠蛋白(Transgelin)。(7)免疫組化驗(yàn)證顯示，ZO-1蛋白在SAP組較SO組表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)，而YSJ組較SAP組表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論:基于iTRAQ技術(shù)的差異蛋白研究為SAP腸道黏膜屏障損傷機(jī)制的研究提供依據(jù)，同時(shí)也能夠較