T790M及EMT在預(yù)測EGFR-TKI繼發(fā)耐藥后化療療效中的重要作用及機制.pdf

1、研究目的:表皮生長因子酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)已經(jīng)成為EGFR基因突變的晚期非小細胞肺癌(NSCLC)的標準治療之一，然而EGFR-TKI的獲得性耐藥已成為影響其療效的瓶頸。目前化療仍是EGFR-TKI耐藥后的最重要治療手段，然而化療療效的預(yù)測和個體化至今難以實現(xiàn)，如何選擇更有效的化療方案意義重大。鑒于既往研究顯示:EGFR-TKI獲得性耐藥后對不同化療藥物敏感性不同，經(jīng)典的T790M突變和非經(jīng)典的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換(EMT)等機

2、制與二線化療療效相關(guān)，我們首次提出科學(xué)假設(shè):EGFR-TKI的不同耐藥機制可能影響后續(xù)化療療效。
　　研究方法:通過EGFR-TKI誘導(dǎo)肺癌細胞PC-9（EGFR突變型）和H460(EGFR野生型)獲得經(jīng)典的T790M突變的細胞株P(guān)C-9/ZD，EMT陽性的耐藥細胞株P(guān)C-9/GR和H460/ER，CCK8法檢測不同肺癌細胞株對化療藥物的敏感性;通過RT-PCR、Western-blot檢測EGFR-TKI獲得性耐藥機制;siRN

3、A干擾下調(diào)T790M突變細胞的T790M基因、轉(zhuǎn)染CDH1后逆轉(zhuǎn)耐藥細胞EMT，檢測各細胞對化療藥物敏感性變化闡明T790M和EMT對化療敏感性的影響;裸鼠成瘤實驗進一步驗證化療療效;裸鼠肺轉(zhuǎn)移模型檢測T790M突變和EMT陽性對裸鼠肺轉(zhuǎn)移、生存的影響。
　　研究結(jié)果:1、對目前治療NSCLC的第三代化療藥物（吉西他濱、培美曲塞、紫杉醇、多西他塞、伊力替康），EGFR野生型肺癌細胞株H460的敏感性差于EGFR基因突變的細胞株P(guān)C

4、-9;而對順鉑的敏感性兩者無差異。2、EGFR-TKI獲得性耐藥后的PC-9/ZD細胞（T790M突變，EMT陰性）與親代PC-9細胞相比，對化療藥物（紫杉醇、多西他塞）的敏感增高，但對化療藥物（順鉑、吉西他濱、培美曲塞）的藥物敏感性無差異。PC-9/ZD(T790M突變，EMT陰性)對化療藥物敏感性（紫杉醇、多西他塞）優(yōu)于PC-9/GR（無T790M突變，EMT陽性）。3、特異性下調(diào)EGFR和T790M突變基因后，NSCLC細胞株P(guān)C

5、-9/ZD對化療藥物（紫杉醇、多西他塞）敏感性均下降。4、EMT陽性NSCLC細胞株(PC-9/GR和H460/ER)對化療藥物（順鉑、吉西他濱、培美曲塞、紫杉醇、多西他塞）敏感性差于親代PC-9和H460細胞株;TGF-β1作用肺癌細胞PC-9和H460后對上述化療藥物敏感性下降;PC-9/GR和H460/ER細胞轉(zhuǎn)染CDH1后逆轉(zhuǎn)EMT，可以恢復(fù)細胞對上述化療藥物的敏感性。5、EGFR-TKI獲得性耐藥細胞株，EMT陽性肺癌細胞(P

6、C-9/GR)裸鼠肺轉(zhuǎn)移數(shù)目多于T790M突變細胞PC-9/ZD，進一步影響裸鼠的生存（EMT陽性PC-9/GR細胞肺轉(zhuǎn)移裸鼠生存期短于T790M突變肺轉(zhuǎn)移裸鼠）。
　　研究結(jié)論:EGFR-TKI獲得性耐藥后細胞不同耐藥機制（T790M突變和EMT陽性）影響后續(xù)的化療療效，T790M是紫杉類化療敏感性的指標，EMT與化療耐藥有關(guān);T790M突變、EMT陽性還是遠處轉(zhuǎn)移和預(yù)后的指標，有T790M突變的肺癌細胞株肺轉(zhuǎn)移數(shù)目少，預(yù)后好;