布加氏綜合征致病基因的外顯子測序研究.pdf

1、背景及目的：原發(fā)性布加氏綜合征（primary budd-chiari syndrome,BCS）發(fā)病機制及病因復雜，且亞洲國家與歐美國家存在明顯的地域差異。在美歐等西方國家，原發(fā)性BCS病因多與靜脈血栓形成相關(guān)，目前研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)JAK2 V617F、FⅤL、FⅡG20210A、MTHFR等多種基因突變與原發(fā)性BCS相關(guān)，這些基因均是血栓形成的危險因素，它們與多種外部因素共同造成了患者血液處于高凝狀態(tài)，肝靜脈血栓形成導致肝靜脈阻塞而最終

2、演變?yōu)樵l(fā)性 BCS；然而在包括日本、中國以及印度等亞洲地區(qū)，在西方國家內(nèi)高表達的相關(guān)基因卻鮮有表達，東方國家原發(fā)型BCS相關(guān)基因仍然處于未知狀態(tài)。
　　分子生物學技術(shù)飛速發(fā)展，下一代測序技術(shù)以其高通量、低成本的獨特優(yōu)勢，使人類全基因組測序成為可能，也為原發(fā)性BCS相關(guān)基因的研究帶來了新的希望。傳統(tǒng)的Sanger測序廣泛運用于基因結(jié)構(gòu)的研究，然而其數(shù)據(jù)產(chǎn)出通量低、成本高、操作復雜的缺陷使其在更深層次的基因研究受限。相較于Sange

3、r測序，NGS測序通量是其數(shù)千倍乃至數(shù)萬倍，而其成本僅僅是前者的千分之一，許多學者已經(jīng)依靠NGS平臺發(fā)現(xiàn)此前從未發(fā)現(xiàn)的基因突變，顯示其在今后基因研究領(lǐng)域潛力無限。
　　通過全基因組外顯子組測序技術(shù)，對原發(fā)性BCS患者的全部外顯子進行篩查，以期發(fā)現(xiàn)特異的基因突變，對原發(fā)性BCS的病因、發(fā)病機制等進行進一步的探討。
　　原發(fā)性BCS是一罕見的臨床綜合征，但在我國河南、安徽等地區(qū)發(fā)病率明顯高于其他地區(qū)，具有明顯的地域以及家族聚集現(xiàn)

4、象。發(fā)現(xiàn)原發(fā)性BCS可能存在的致病基因，可以針對高危人群進行早期的檢測及預防。
　　方法：
　　1.病例采集
　　本科室長期隨訪一原發(fā)性BCS家系。家系內(nèi)共8人（5名男性，3名女性），所有人均接受下腔靜脈彩超及CT下腔靜脈成像檢查，確診原發(fā)性BCS患者3名。采集外周靜脈血標本。
　　2.外顯子組測序
　　根據(jù)外顯子組測序的規(guī)范流程，提取基因組DNA，建立文庫，外顯子測序，上機測序，生物學信息分析，確定候選基

5、因。
　　3．數(shù)據(jù)分析
　　通過文獻復習，蛋白質(zhì)功能預測，突變頻率等總結(jié)出感興趣的候選基因。
　　4.候選基因驗證
　　對候選基因進行PCR/sanger測序驗證。
　　結(jié)果：外顯子組測序結(jié)果生物信息學分析結(jié)果得出2例患者共有53共有基因突變，從中篩選出2兩個基因突變：HSPG2 c.C4508T、GPR126 c.T3242G。對這兩個突變進行驗證均得到了陽性的驗證結(jié)果。
　　結(jié)論：HSPG2 c.