耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌對替加環(huán)素的耐藥機(jī)制及流行特性研究.pdf

1、目的：
　　1.了解2012～2014年間溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床分離的耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌對臨床常見抗菌藥物的耐藥情況，為臨床有效控制鮑曼不動(dòng)桿菌感染和合理使用抗菌藥物提供理論依據(jù)。
　　2.探究耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌對替加環(huán)素耐藥可能存在的機(jī)制，為有效預(yù)防鮑曼不動(dòng)桿菌替加環(huán)素耐藥株的出現(xiàn)提供理論基礎(chǔ)。
　　3.研究替加環(huán)素非敏感鮑曼不動(dòng)桿菌的分子流行特性，從而控制多重耐藥菌株的院內(nèi)傳播，延長替加環(huán)素在臨床

2、上的使用壽命。
　　方法：
　　1.回顧性調(diào)查2012年至2014年間臨床分離碳青霉烯類耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的感染分布和耐藥情況;應(yīng)用Vitek2 Compact全自動(dòng)微生物分析儀對臨床常用抗菌藥物進(jìn)行藥物敏感性檢測;應(yīng)用微量肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法和E-test方法檢測鮑曼不動(dòng)桿菌對替加環(huán)素的耐藥情況。
　　2.采用微量肉湯稀釋法測定120株鮑曼不動(dòng)桿菌對替加環(huán)素的MIC值，根據(jù)EUCAST標(biāo)準(zhǔn)，將菌株分為鮑曼不動(dòng)桿菌替加

3、環(huán)素敏感菌株(TSAB)和替加環(huán)素非敏感菌株（TNAB）兩組;PCR方法檢測兩組菌株中外排泵基因adeB、adeJ、 adeG、abeM、 adeE和外排泵調(diào)控基因adeRS以及tetX和tetX1基因的攜帶情況。
　　3.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測13株TNAB和其中8株TSAB菌株外排泵基因adeB、adeJ、 adeG和abeM的表達(dá)情況。
　　4.檢測所有TNAB和1株TSAB菌株在加入10μ g/ml外排泵抑制劑羰

4、基氰化物間氯苯腙（carbonylcyanidem-chlorophenylhydrazone，CCCP）前后菌株對替加環(huán)素的MIC值變化情況。
　　5.應(yīng)用脈沖場凝膠電泳（Pulsed field gel electrophoresis，PFGE）及多位點(diǎn)序列分型（Multilocus sequence typing，MLST）分析替加環(huán)素非敏感鮑曼不動(dòng)桿菌的分子流行特性。
　　結(jié)果：
　　1.369株耐碳青霉烯類鮑

5、曼不動(dòng)桿菌主要來源于痰液，占88.6％(327/369)，其次為血液3.0％(11/369)，創(chuàng)面2.2％(8/369)，其他標(biāo)本如膿液、尿液、引流液、導(dǎo)管、腦脊液和敷料等占6.2％(23/369)。鮑曼不動(dòng)桿菌感染病區(qū)的分布主要以ICU為主，占60.7％(224/369)，其次為神經(jīng)外科和腦外科，占12.5％(46/369)，呼吸內(nèi)科占8.4％(31/369)，燒傷外科占5.1％(19/369)。369株耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌對替加

6、環(huán)素以外的其他臨床常見抗菌藥物耐藥現(xiàn)象非常嚴(yán)重，耐藥率均達(dá)到90％以上，頭孢曲松、頭孢他啶、環(huán)丙沙星、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦甚至達(dá)到100％。
　　2.微量肉湯稀釋法檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)120株耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌對替加環(huán)素的MIC值范圍為0.25～8μg/ml，其中TNAB13株，包括中介8株，耐藥5株。120株耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌中adeR和adeS基因的檢出率分別為90.0％(108/120)和92.5％(111/120

7、)，adeB、adeJ、 adeG和adeM基因的檢出率均為94.2％(113/120)，而adeE、tetX和tetX1基因均為陰性。經(jīng)過x2檢驗(yàn)，TNAB組和TSAB組相比，外排泵基因檢出率無顯著性差異。
　　3.與TSAB菌株相比，TNAB菌株adeB和adeJ基因表達(dá)量平均分別提高了18.69和5.46倍，而adeG和abeM基因表達(dá)量無明顯提高（分別為1.51和1.04倍）。
　　4.在加入外排泵抑制劑CCCP后，

8、13株TNAB菌株中8株(B3、B5、B6、B7、B8、B9、B11和B12)的MIC值降低4倍以上，為外排泵陽性菌株，其余5株TNAB的MIC值均下降2倍，而TSAB菌株的MIC沒有變化。
　　5.PFGE結(jié)果顯示替加環(huán)素非敏感鮑曼不動(dòng)桿菌屬于同一個(gè)克隆型;MLST顯示共存在8種ST型，包括4種新的ST型，分別為ST1142、ST1143、ST1144和ST1145，其中ST191為本研究TNAB的主要ST型，屬于克隆復(fù)合體(C

9、lonal Complex, CC)92。
　　結(jié)論：
　　1.本院臨床分離的耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌主要分離自痰液，主要分離病區(qū)為ICU，對臨床常見的抗菌藥物耐藥非常嚴(yán)重，而替加環(huán)素的敏感率較高，但2013年和2014年我院仍分離出13株替加環(huán)素非敏感鮑曼不動(dòng)桿菌。
　　2.本院耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌對替加環(huán)素敏感性下降的主要原因是外排泵基因adeB和adeJ的過度表達(dá)，而外排泵系統(tǒng)adeFGH和abeM可能與鮑曼