周期性張應(yīng)變條件下血管內(nèi)皮細(xì)胞源性微體在內(nèi)皮細(xì)胞增殖中的作用.pdf

1、內(nèi)皮源性微體（endothelial microparticles，EMPs）是由活化或凋亡的內(nèi)皮細(xì)胞（endothelial cells，ECs）產(chǎn)生，直徑介于0.1μm到1μm之間的小顆粒。近年來，EMPs在細(xì)胞間生物信息傳遞以及心血管疾病發(fā)病過程中的作用逐漸引起重視。已有研究表明，在動脈粥樣硬化和高血壓等心血管疾病發(fā)病過程中，ECs表面蛋白如細(xì)胞間黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecul

2、e-1，ICAM-1）、血管細(xì)胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）等表達(dá)上調(diào)，使得 ECs能夠招募血液中的細(xì)胞尤其是白細(xì)胞，從而參與血管重建。然而，高血壓狀態(tài)下在異常增高的動脈周期性張應(yīng)變（cyclic strain）的作用下，以及血管炎癥狀態(tài)下在腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）刺激下，ECs所產(chǎn)生的EMPs是否也同樣高表達(dá)ECs表面

3、蛋白，是否能作為信息載體調(diào)控ECs增殖尚不清楚。
　　本實(shí)驗(yàn)對體外模擬高血壓狀態(tài)（高周期性張應(yīng)變）和TNF-α刺激這兩種條件下ECs產(chǎn)生的EMPs進(jìn)行研究，探討了高張應(yīng)變條件下產(chǎn)生的EMPs對ECs增殖的影響。采用Flexercell細(xì)胞張應(yīng)變加載系統(tǒng)對大鼠胸主動脈ECs分別施加5％（正常生理狀態(tài)）和18%（模擬高血壓狀態(tài)）幅度的周期性張應(yīng)變，加載頻率均為1.25 Hz，加載持續(xù)時(shí)間為24 h，然后收集上清液，進(jìn)行超速離心，棄上清

4、，提取得到EMPs；用親脂性苯乙烯基（lipophilic styryl）以及電鏡對離心得到的EMPs進(jìn)行形態(tài)鑒定；用流式細(xì)胞術(shù)對不同加載幅度的張應(yīng)變加載以及 TNF-α刺激產(chǎn)生的EMPs進(jìn)行 AnnexinV陽性計(jì)數(shù)與EMPs表面ICAM-1表達(dá)量測定；熒光定量PCR（RT-PCR）檢測不同張應(yīng)變條件下ECs的TNF-αmRNA表達(dá)變化；對收集到的不同張應(yīng)變條件下產(chǎn)生的EMPs與正常ECs進(jìn)行共培養(yǎng)，BrdU-ELISA法檢測不同張應(yīng)

5、變作用下產(chǎn)生的EMPs對ECs增殖的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，18%高張應(yīng)變組ECs所產(chǎn)生AnnexinV陽性EMPs的數(shù)量明顯高于5%正常張應(yīng)變組（p<0.05）；與5%正常張應(yīng)變組相比，18%高張應(yīng)變組EMPs表面ICAM-1分子的表達(dá)量顯著上升（p<0.05）；同樣，與對照組相比，TNF-α刺激條件下 ECs所產(chǎn)生AnnexinV陽性EMPs的數(shù)量與EMPs表面ICAM-1的表達(dá)也顯著上升（p<0.05）；與5%正常張應(yīng)變組

6、相比，18%的高張應(yīng)變條件下ECs的TNF-αmRNA表達(dá)量顯著上升（p<0.05）；與5%正常張應(yīng)變組相比，18%高張應(yīng)條件下產(chǎn)生的EMPs刺激ECs后OD450吸光度顯著上升（p<0.05）。結(jié)果表明，高張應(yīng)變和TNF-α刺激條件下ECs所產(chǎn)生的EMPs數(shù)量增加，且都攜帶了細(xì)胞表面分子ICAM-1；高張應(yīng)變條件下ECs產(chǎn)生的EMPs具有較強(qiáng)的促進(jìn)ECs增殖的作用。
　　本研究發(fā)現(xiàn)了高周期性張應(yīng)變與 TNF-α刺激條件下 ECs