間歇性低壓低氧對(duì)大鼠肺動(dòng)脈高壓預(yù)防作用的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制.pdf

1、目的:肺動(dòng)脈高壓(Pulmonary arterial hypertension，PAH)是以肺動(dòng)脈壓力升高以及血管痙攣、內(nèi)膜增生和重構(gòu)為主要特征的一種疾病。其主要的病理變化是受損的肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞以及增生的平滑肌細(xì)胞引起的血管重構(gòu)，組織學(xué)研究表明，肺動(dòng)脈周邊存在肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞等炎癥細(xì)胞及其釋放出的趨化因子、黏附分子和細(xì)胞因子，最終使得肺血管組織的內(nèi)皮受損和平滑肌細(xì)胞增殖[1]。證明肺動(dòng)脈高壓的

2、發(fā)生發(fā)展中，免疫系統(tǒng)的紊亂參與其中。近些年，大量基礎(chǔ)研究表明，間歇性低壓低氧(intermittent hypobaric hypoxia，IHH)可影響免疫應(yīng)答的性質(zhì)和強(qiáng)度，減低免疫性疾病的發(fā)生與發(fā)展，提高免疫力。間歇性低氧包括常壓低氧和低壓低氧，常壓低氧方式可對(duì)機(jī)體是不利的。大量的研究表明，間歇性低壓低氧的環(huán)境對(duì)機(jī)體組織低氧的耐受性對(duì)多種器官、組織以及提高機(jī)體免疫力方面均明顯表現(xiàn)出有益的方面，能提高機(jī)體缺血、缺氧的耐受性，對(duì)缺血導(dǎo)致

3、的心功能受損、心律失常其保護(hù)作用，對(duì)神經(jīng)、腎臟、肝臟等重要組織器官產(chǎn)生有益的影響，此外還具有降壓作用[2，3]。本研究旨在通過肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型，給予CIHH處理，利用免疫組化、ELISA等方法，從動(dòng)物整體、離體組織及細(xì)胞不同水平，系統(tǒng)地觀察IHH預(yù)處理對(duì)肺動(dòng)脈高壓的影響，并深入探討其免疫學(xué)機(jī)制。
　　方法:
　　1、建立模型:SD(Sprague Dawley)大鼠40只，購(gòu)于河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體重150-200g

4、，并飼養(yǎng)在河北醫(yī)科大學(xué)生理教研室的無病原菌的動(dòng)物房中，定期更換墊料及鼠食。隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組10只，(Control組)，MCT腹腔注射組10只(60 mg/kg)，IHH處理組10只，IHH+MCT組10只。
　　MCT組:SD大鼠采用野百合堿(Monocrotaline，MCT)以60mg/kg劑量一次性腹腔注射，以誘導(dǎo)大鼠慢性PAH模型在注射14天后用將頭端改良的PE-50管檢測(cè)右心室收縮壓(Right heart s

5、ystolic pressure，RVSP)及肺動(dòng)脈壓力，以鑒定慢性PAH大鼠模型。
　　IHH組:SD大鼠置于低壓低氧艙內(nèi)，接受模擬5000米海拔高度(PB=525mmHg，PO2=108.8mmHg，O2濃度11.1％，大氣壓400mmHg)的低壓低氧處理，每天6小時(shí)，其余時(shí)間仍處在正常氧氣及氣壓條件，連續(xù)經(jīng)受28d的間歇性低氧。
　　IHH+MCT組:SD大鼠置于低壓低氧艙內(nèi)，接受模擬5000米海拔高度(PB=525m

6、mHg，PO2=108.8mmHg，O2濃度11.1％，大氣壓400mmHg)，每天6h的低氧處理，其余時(shí)間仍處在正常氧氣及氣壓條件，連續(xù)經(jīng)受28d的間歇性低氧后采用MCT以60mg/kg劑量一次性腹腔注射，以誘導(dǎo)大鼠慢性PAH模型，在注射14天后用將頭端改良的PE-50管檢測(cè)右心室收縮壓(Right heart systolic pressure，RVSP)及肺動(dòng)脈壓力。
　　2、大鼠肺動(dòng)脈高壓變化:用右心導(dǎo)管法測(cè)定大鼠平均肺動(dòng)

7、脈壓(meanpulmonary artery pressure,mPAP)。
　　3、采用高保真彩色圖像分析系統(tǒng)對(duì)肺組織切片的TNF-α和IL-6表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行定量分析。
　　4、采用ELISA方法檢測(cè)血清中TNF-α、IL-16含量。
　　結(jié)果:
　　1、成功建立大鼠PAH模型:MCT腹腔注射組大鼠mPAP明顯升高(44.26±3.24)mmHg，與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(16.68±0.78)mmHg

8、,P＜0.01]。
　　2、IHH+MCT大鼠PAH發(fā)生率(20％)明顯低于MCT組大鼠(90％);IHH與CON間PAH發(fā)生率無明顯變化。
　　3、肺組織中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白介素-6(IL-6)蛋白表達(dá)變化
　　肺組織免疫組化染色顯示，與MCT組比較，IHH組大鼠肺組織TNF-α、IL-6表達(dá)明顯減低(P＜0.05）;與Control組比較，MCT組TNF-α、IL-6明顯升高(P＜0.01)，IHH

9、組TNF-α、IL-6也升高，但與Control組無顯著性差異（P＞0.05）;與MCT組比較IHH+MCT組大鼠肺組織TNF-α、IL-6表達(dá)明顯下降（P＜0.05）;與Control組比較IHH+MCT組TNF-僅、IL-6表達(dá)與Control組無顯著性差異（P＞0.05）。
　　4、血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)蛋白表達(dá)變化
　　與MCT組比較，IHH組大鼠血清中TNF-α、IL-6表達(dá)明顯

10、減低(P＜0.05);與Control組比較，MCT組TNF-α、 IL-6明顯升高(P＜0.01)，IHH組TNF-α、IL-6也升高，但與Control組無顯著性差異（P＞0.05）;與MCT組比較IHH+MCT組大鼠血清TNF-α、IL-6表達(dá)明顯下降(P＜0.05），與Control組比較IHH+MCT組TNF-α、IL-6表達(dá)與Control組無顯著性差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、成功制備MCT誘導(dǎo)大