RELM-β在大鼠低氧性肺動脈高壓中的作用及機制研究.pdf

1、目的：通過建立不同低氧時間的慢性常壓低氧性肺動脈高壓（HPH）大鼠模型，觀察抵抗素樣分子β（RELM-β）在HPH大鼠肺組織及肺血管表達情況，干預HPH大鼠模型肺部RELM-β表達，研究其在低氧性肺動脈平滑肌增殖中的作用，并探索PI3K/Akt/mTOR和PKC/MAPKs信號通路是否參與該過程的作用機制，從而為研究低氧性肺血管重塑（HPSR）提供新的理論依據(jù)。
　　方法：實驗共分為三部分。
　　1.建立不同低氧時間（H3、

2、H7、H14、H21）慢性常壓低氧性肺動脈高壓大鼠模型，用右心導管法測量大鼠平均肺動脈壓（mPAP），稱量法計算Fulton指數(shù)（RV/LV+S），并進行 HPSR指標觀察；用Western-blot、熒光實時定量PCR、免疫組織化學及ELISA等方法檢測各低氧時間組肺組織、肺血管、肺泡灌洗液及血清RELM-β的表達情況。
　　2.將帶有沉默RELM-βsiRNA基因的慢病毒通過氣管內(nèi)滴注轉染至大鼠肺內(nèi)后低氧21天，Western

3、-blot、熒光實時定量PCR、免疫熒光法檢測肺組織和肺血管RELM-β表達情況；將重組RELM-β蛋白通過氣管內(nèi)滴注間斷持續(xù)導入大鼠肺內(nèi)增強RELM-β表達，同時低氧21天，用右心導管法測量大鼠平均肺動脈壓（mPAP），稱量法計算Fulton指數(shù)（RV/LV+S），并進行 HPSR指標觀察。
　　3. Western-blot、免疫組織化學法檢測沉默RELM-β組和過表達RELM-β組肺組織及肺血管p-PI3K（P85

4、）、p-Akt、p-mTOR和p-PKC、p-P44/42（Thr202/Tyr204）表達情況。
　　結果：
　　1.Western blot結果顯示隨著缺氧時間的遞增RELM-β在肺組織、肺泡灌洗液、血清中表達隨不同低氧時間而變化，其蛋白表達和mRNA轉錄均在14天時達到高峰，21天下降但仍維持高水平(P＜0.05)。
　　2.定位觀察可見低氧條件下RELM-β主要表達在肺血管平滑肌，Ⅱ型肺泡上皮，血管內(nèi)皮及炎癥細

5、胞也有表達。
　　3.慢病毒介導siRNA干擾RELM-β在大鼠肺組織及肺血管的表達有效（P＜0.05），同時HPH大鼠模型心血管重塑程度明顯降低（P＜0.05）。
　　4.向大鼠肺內(nèi)給予重組RELM-β蛋白后大鼠心血管重塑情程度較低氧對照組明顯嚴重，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　5.干預RELM-β能影響肺動脈壁PI3K、Akt、mTOR和PKC、MAPKs磷酸化水平（P＜0.05）。
　　結論：<