TGF-β1-mTOR信號通路在虎杖白藜蘆醇抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖中的作用及機(jī)制.pdf

1、瘢痕疙瘩(keloid)是創(chuàng)傷修復(fù)的病態(tài)產(chǎn)物，中藥單體虎杖白藜蘆醇(Res)能夠誘導(dǎo)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞凋亡，且能抑制其增殖，對本病有一定療效，但其作用的具體機(jī)制尚不清楚。瘢痕疙瘩的形成受多種基因、多條信號通路調(diào)控，研究認(rèn)為TGF-β1是瘢痕疙瘩形成最關(guān)鍵的細(xì)胞因子，在瘢痕疙瘩形成過程中對多條信號通路均有影響。目前研究顯示mTOR在TGF-β1的信號傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，mTOR信號通路可以影響蛋白質(zhì)的合成，對細(xì)胞的增殖、分化都具有調(diào)節(jié)作用

2、。mTOR信號通路介導(dǎo)多種腫瘤性疾病，而瘢痕疙瘩具有類似腫瘤的生長特點(diǎn)，屬于良性實(shí)體瘤，因此在TGF-β1介導(dǎo)的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖過程中，mTOR信號通路可能也發(fā)揮重要作用。本課題研究TGF-β1/mTOR信號通路在瘢痕疙瘩中的表達(dá)情況，同時(shí)研究Res在作用瘢痕疙瘩過程中對該通路的影響和有效作用靶點(diǎn)。
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>　　研究瘢痕疙瘩中TGF-β1/mTOR信號軸中TGF-β1、PI3K、Akt、mTOR等關(guān)鍵分子的表達(dá)情

3、況，證實(shí)瘢痕疙瘩組織中該信號通路存在異常表達(dá)，同時(shí)證實(shí)Res對瘢痕疙瘩這一信號通路有影響，并且明確其作用靶點(diǎn)。
　　實(shí)驗(yàn)方法
　　本實(shí)驗(yàn)將瘢痕疙瘩和正常皮膚成纖維細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，對所培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。實(shí)驗(yàn)分三組:正常皮膚組(normal組)研究人正常皮膚成纖維細(xì)胞，瘢痕疙瘩組(keloid組)研究瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞，白藜蘆醇組(Res組)研究經(jīng)Res作用的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞。(1)免疫熒光技術(shù)觀察瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中T

4、GF-β1、PI3K、Akt、mTOR等關(guān)鍵分子的分布情況;(2) RT-PCR技術(shù)檢測各組TGF-β1/mTOR信號通路中TGF-β1 mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA、mTORmRNA的表達(dá)情況;(3) Western-blot技術(shù)觀察三組TGF-β1/mTOR信號通路中TGF-β1、PI3K、Akt、mTOR等重要細(xì)胞因子的蛋白表達(dá)情況。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　免疫熒光結(jié)果表明瘢痕成纖維細(xì)胞中TGF-β1、P

5、I3K、Akt、mTOR等關(guān)鍵分子在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)。RT-PCR檢測結(jié)果顯示:keloid組TGF-β1 mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA等表達(dá)均高于normal組(P＜0.05);Res組TGF-β1 mRNA、PI3KmRNA、Akt mRNA、mTORmRNA的表達(dá)均比keloid組低(P＜0.05)。Western-blot檢測結(jié)果顯示:keloid組TGF-β1、PI3K、Akt、m

6、TOR蛋白表達(dá)量均高于normal組(P＜0.05);Res組TGF-β1、PI3K、mTOR蛋白表達(dá)量均低于keloid組(P＜0.05);Res組Akt蛋白表達(dá)量雖低于keloid組，但兩組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論
　　瘢痕疙瘩中存在異常激活的TGF-β1/mTOR信號通路，且TGF-β1、PI3K、Akt、mTOR等為其關(guān)鍵分子，在瘢痕疙瘩中有高表達(dá)。Res對瘢痕疙瘩TGF-β1/mTOR通路