EtNBSe-PDT對成纖維細(xì)胞增殖和TGF-β1分泌的影響及信號通路研究.pdf

1、目的:
　　 1.觀察EtNBSe-PDT對體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞增殖活性及TGF-β1分泌的影響。
　　 2.觀察EtNBSe-PDT對體外培養(yǎng)成纖維細(xì)胞內(nèi)MAPK家族成員ERK、JNK、P38活性影響和信號蛋白的時相性變化，以及抑制劑干預(yù)中磷酸化表達(dá)水平的影響。
　　 方法:
　　 1.分離培養(yǎng)正常人包皮成纖維細(xì)胞，采用角蛋白和Ⅰ、Ⅲ型膠原染色進(jìn)行成纖維細(xì)胞的鑒定。
　　 2.采用梯度紅光照射、

2、梯度EtNBSe濃度和EtNBSe聯(lián)合紅光照射處理成纖維細(xì)胞;在抑制劑干預(yù)研究中，應(yīng)用ERK、JNK、P38信號通路特異性抑制劑(PD98059、SP600125、SB203580)分別處理成纖維細(xì)胞，四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測各組成纖維細(xì)胞增殖和抑制的變化。
　　 3.EtNBSe聯(lián)合紅光照射處理成纖維細(xì)胞，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測TGF-β1分泌變化。
　　 4.蛋白質(zhì)免疫印跡(western blot)

3、法測定磷酸化ERK、JNK、P38的活性及時相性變化;同時觀察在抑制劑干預(yù)中，磷酸化ERK、JNK、P38的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.體外培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)Ⅰ、Ⅲ型膠原染色陽性，角蛋白染色陰性，細(xì)胞具有成纖維細(xì)胞形態(tài)。
　　 2.成纖維細(xì)胞經(jīng)梯度紅光照射(10、30、60、90min)后，與對照組比較，細(xì)胞不產(chǎn)生明顯的細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒效應(yīng)(P＞0.05)。在梯度濃度EtNBSe(30、60、120、240pM)分

4、別作用培養(yǎng)1、2h后，各組細(xì)胞間未觀察到明顯的增殖活性和細(xì)胞毒反應(yīng)(P＞0.05)。在梯度EtNBSe(30、60、120、240pM)+紅光照射組，梯度EtNBSe處理1h后照光，與對照組比較，對細(xì)胞不產(chǎn)生明顯的細(xì)胞毒反應(yīng)及細(xì)胞增殖活性(P＞0.05);在梯度EtNBSe處理2h后照光，EtNBSe(30、60、120pM)對成纖維細(xì)胞有增殖活性，以EtNBSe(60、120pM)增殖活性最明顯(P＜0.05)。在抑制劑干預(yù)組中，與對

5、照組比較，抑制劑中(PD98059、SB203580)+照光組，細(xì)胞活性受到明顯抑制(P＜0.05);SP600125細(xì)胞活性無明顯變化。
　　 3.與對照組比較，成纖維細(xì)胞在經(jīng)60、120pM EtNBSe-PDT處理后，TGF-β1分泌均增加(P＜0.05)，以120pM更明顯。
　　 4.濃度組:與對照組比較，30、60、120pMEtNBSe-PDT可促進(jìn)磷酸化ERK蛋白的活化;30、60pM可促進(jìn)磷酸化JNK和

6、P38蛋白的活化，隨著劑量的增加逐漸抑制兩者的活性。時間組:ERK、JNK、P38均有不同程度的活化，與對照組比較，ERK在60分鐘時達(dá)到峰值;JNK和P38在90分鐘時達(dá)到峰值。干預(yù)組:與對照組比較，PD98059、SB203580可顯著抑制磷酸化ERK、P38的活性;SP600125對磷酸化JNK抑制作用不明顯。
　　 結(jié)論:
　　 1.EtNBSe-PDT可促進(jìn)體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)TGF-β1分泌的增加