ERK信號(hào)通路及TGF-β1在強(qiáng)脈沖光對(duì)成纖維細(xì)胞增殖影響中的作用.pdf

1、目的：
　　 1.觀察強(qiáng)脈沖光對(duì)體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響。
　　 2.探討細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)信號(hào)通路及轉(zhuǎn)化生長因子β-1(TGF-β1)在強(qiáng)脈沖光對(duì)成纖維細(xì)胞增殖影響中的作用。
　　 方法：
　　 1.分離培養(yǎng)人正常皮膚成纖維細(xì)胞,采用角蛋白和Ⅰ、Ⅲ型膠原染色進(jìn)行成纖維細(xì)胞的鑒定。
　　 2.采用不同能量強(qiáng)脈沖光照射成纖維細(xì)胞,光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；四甲基偶氮唑鹽(M

2、TT)法檢測各組細(xì)胞增殖情況；蛋白質(zhì)免疫印跡(western blot)法測定磷酸化ERK變化。
　　 3.在抑制劑干預(yù)研究中,應(yīng)用ERK信號(hào)通路特異性抑制劑PD98059、PD98059+強(qiáng)脈沖光分別處理成纖維細(xì)胞,觀察成纖維細(xì)胞增殖及磷酸化ERK的變化。
　　 4.采用不同能量強(qiáng)脈沖光照射成纖維細(xì)胞,酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測TGF-β1分泌變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.培養(yǎng)細(xì)胞具有成纖維細(xì)胞

3、形態(tài),經(jīng)角蛋白染色陰性,Ⅰ、Ⅲ型膠原染色陽性。
　　 2.成纖維細(xì)胞經(jīng)強(qiáng)脈沖光照射后與未照射組在光學(xué)顯微鏡下比較形狀無明顯差異。與未照射組比較,照射后12、24及48小時(shí),10、18、27、36 J/cm2的強(qiáng)脈沖光對(duì)成纖維細(xì)胞增殖均無影響(P>0.05)；當(dāng)能量為36J/cm2×2(36J/cm2連續(xù)照射2次)時(shí),細(xì)胞增殖活性于照射后24及48小時(shí)顯著增高(P<0.05)。36J/cm2的強(qiáng)脈沖光對(duì)成纖維細(xì)胞磷酸化ERK無明顯

4、影響,當(dāng)能量為36J/cm2×2時(shí)磷酸化ERK表達(dá)明顯減少。
　　 3.與未照射組比較,PD98059能明顯抑制成纖維細(xì)胞的增殖和降低磷酸化ERK水平。
　　 4.與未照射組比較,36J/cm2的強(qiáng)脈沖光對(duì)成纖維細(xì)胞TGF-β1分泌無明顯影響(P>0.05),當(dāng)能量為36J/cm2×2時(shí),成纖維細(xì)胞TGF-β1分泌顯著增加(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 強(qiáng)脈沖光照射可促進(jìn)體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞