環(huán)磷腺苷葡胺聯(lián)合粒細(xì)胞集落刺激因子對舒張性心力衰竭大鼠心功能的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、目的:通過觀察環(huán)磷腺苷葡胺(MCA)聯(lián)合粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)對舒張性心力衰竭（DHF）大鼠心臟功能及cAMP/PKA信號通路、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)心肌特異性基因mRNA和蛋白表達(dá)水平、心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因蛋白的表達(dá)以及血清標(biāo)志物腦鈉肽(BNP)、糖類抗原CA125(CA125)、超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、血管緊張素(ANG-2)水平的影響，探討MCA聯(lián)合G-CSF對DHF大鼠心功能的影響及其可能機(jī)制。

2、　　方法:取成功建模后的60只SD雄性大鼠分為4組，空白對照組(Control)、舒張性心力衰竭模型組(Model)、環(huán)磷腺苷葡胺治療組(MCA)及環(huán)磷腺苷葡胺聯(lián)合粒細(xì)胞集落刺激因子治療組(MCA+G-CSF)，各組分別給與相應(yīng)的藥物干預(yù)。干預(yù)15天后，超聲心動(dòng)圖與BL-420F生理記錄儀測定心臟功能，免疫組化檢測各組大鼠心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;采用RT-PCR和Western blot法分別檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)心肌特異性基因

3、GATA結(jié)合蛋白4（GATA-4）、縫隙連接蛋白43(Cx43)、心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTNI)及干細(xì)胞受體蛋白c-kit表達(dá)水平;心肌細(xì)胞抗凋亡基因BcL-2與促凋亡基因Bax的表達(dá)水平，ELISA測定細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷（cAMP）水平和BNP、CA125、hs-CRP、ANG-2水平，流式細(xì)胞儀檢測BMSCs細(xì)胞分化。
　　結(jié)果:首先，通過模擬大鼠DHF病理狀態(tài)，對其血流動(dòng)力學(xué)分析發(fā)現(xiàn)單獨(dú)MCA治療與MCA聯(lián)合G-CSF治療能顯著提

4、高DHF大鼠心臟的舒張功能，同時(shí)也提高它們的收縮功能;通過超聲心動(dòng)圖檢測發(fā)現(xiàn)MCA和G-CSF主要通過降低DHF大鼠的LVDd和LVM指標(biāo)來改善心臟功能;通過組織學(xué)切片研究發(fā)現(xiàn)DHF大鼠心肌組織出現(xiàn)纖維化、壞死、水腫、肌源纖維斷裂、排列混亂等，而MCA能夠降低心肌細(xì)胞水腫，G-CSF能夠促進(jìn)心肌細(xì)胞再生，從而恢復(fù)心臟功能。
　　其次，通過檢測心肌特異表達(dá)基因及其蛋白的變化情況，發(fā)現(xiàn)DHF大鼠Model組較Control組GATA-

5、4、Cx43基因表達(dá)和蛋白量明顯升高（P＜0.05），MCA組和MCA聯(lián)合G-CSF組的GATA-4、Cx43基因和蛋白表達(dá)較Model組大鼠又有顯著上升(P＜0.05），心肌特異蛋白cTNI與干細(xì)胞受體c-kit蛋白的變化趨勢與GATA-4、Cx43一致，這從蛋白水平上說明了MCA和G-CSF通過促進(jìn)心肌特異性基因及蛋白的表達(dá)，促進(jìn)心肌細(xì)胞的發(fā)育，恢復(fù)DHF大鼠的心臟功能。MCA和G-CSF通過提高細(xì)胞內(nèi)cAMP水平來提高心肌細(xì)胞的存

6、活率，MCA聯(lián)合G-CSF在增加細(xì)胞內(nèi)cAMP水平上具有顯著作用。
　　第三，DHF大鼠抗凋亡基因BcL-2及其蛋白表達(dá)降低，而促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡的Bax基因和蛋白的含量則明顯上升(P＜0.05)，說明是由于BcL-2的表達(dá)下降與Bax的表達(dá)上升導(dǎo)致了心肌細(xì)胞出現(xiàn)凋亡、壞死、水腫、肌源纖維斷裂、排列混亂和心肌組織纖維化等現(xiàn)象，而MCA能夠在mRNA水平和蛋白水平上促進(jìn)BcL-2的表達(dá)，抑制Bax的表達(dá)，MCA聯(lián)合G-CSF對這兩個(gè)基

7、因及蛋白的表達(dá)促進(jìn)和抑制作用更為顯著，從而降低心肌細(xì)胞的凋亡，改善心力衰竭大鼠的心臟功能。
　　最后，血清中相關(guān)因子BNP、CA125、hs-CRP、ANG-2水平在心力衰竭大鼠血清中含量最高，當(dāng)使用MCA及MCA聯(lián)合G-CSF藥物干預(yù)時(shí)BNP、CA125、hs-CRP、ANG-2因子水平下降明顯(P＜0.05），其中MCA聯(lián)合G-CSF使用時(shí)下降最為顯著(P＜0.05)。對各組BMSCs分化情況分析發(fā)現(xiàn)，Control組細(xì)胞分化

8、程度最低，Model組、MCA組、MCA+G-CSF組分化程度依次升高，這與上述心肌特異性基因的表達(dá)情況相一致。
　　結(jié)論:MCA聯(lián)合G-CSF可明顯改善DHF大鼠心臟功能;通過cAMP/PKA途徑促進(jìn)心肌細(xì)胞發(fā)育早期基因GATA-4、Cx43表達(dá)，促使BMSCs向心肌細(xì)胞方向分化;能夠調(diào)控心肌細(xì)胞凋亡基因表達(dá)，延緩心肌細(xì)胞凋亡;明顯降低血清BNP、CA125、hs-CRP、ANG-2水平;MCA聯(lián)合G-CSF治療DHF大鼠療效明