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文檔簡介
1、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor,以下簡稱GM-CSF),是一種具有刺激粒系、巨噬細胞系細胞分化和成熟的糖蛋白,被臨床廣泛用于對骨髓移植等治療手段或HIV感染等疾病造成的粒細胞減少的治療。此外,它在各類疫苗中作為免疫佐劑的功效也被廣泛的研究。然而,與一般的蛋白治療藥物相似,人的GM-CSF的體內(nèi)半衰期短,同時相關疾病的治療周期長,病人必須接受頻
2、繁而長期的注射。為了減少其注射頻率、延長蛋白作用的時間,國際上報道了各種嘗試,然而,它們各自仍然存在許多問題??偨Y(jié)起來,如何在盡可能保持蛋白自然狀態(tài),即既不對蛋白本身進行結(jié)構的改變,如化學修飾,也不因為制備等過程傷害蛋白結(jié)構的穩(wěn)定性的情況下,制備能夠抑制突釋和不完全釋放等問題,具有良好釋放形態(tài)的緩釋系統(tǒng)已成為大分子緩釋領域一大挑戰(zhàn),也成為我們的研究目標。本研究中我們采用了新型的高分子水相-水相乳化技術,利用兩種水溶性高分子通過表面活性劑
3、的作用,在溫和的、無油相存在的條件下乳化形成穩(wěn)定的乳液,凍干后形成多糖玻璃體顆粒包封蛋白。由于乳化過程中無有機溶劑的存在,避免了水-油界面和界面張力的產(chǎn)生,保護了蛋白活性。該法制成粒徑在1μm~5μm的多糖玻璃體微粒,大小均勻、表面圓滑、不粘連。第二步,我們將含有蛋白的多糖微粒通過水包油包固的方法擔載于PLGA緩釋微球中。由于蛋白擔載于含有多糖高分子的玻璃體顆粒內(nèi),高分子玻璃體顆粒對于有機溶劑具有一定的抗性,再次避免了在傳統(tǒng)W/O/W法
4、中蛋白直接與水-油界面相接觸造成的活性損失,在該步驟內(nèi)進一步保護蛋白。該步驟制得的含顆粒微球粒徑在60-120μm左右,微球外觀性質(zhì)良好。對該法制備過程的考察結(jié)果顯示,對GM-CSF其具有較高的包封率,達到80%以上;對回收率的檢測結(jié)果顯示,第一步顆粒的制備過程中,幾乎沒有物理損失,而第二步微球制備中,回收率在60%-70%。同時,該法在制備過程中較好的保護了蛋白活性,顆粒和微球的活性都在85%以上。而對體外釋放和活性的進一步考察表明,
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