從腦腸互動(dòng)研究涼血通瘀方對(duì)腦出血大鼠的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制.pdf

1、目的:建立與臨床急性腦出血相近的自體尾動(dòng)脈注血誘發(fā)腦出血大鼠模型。立足于“腦腸互動(dòng)”學(xué)說，從神經(jīng)組織學(xué)、神經(jīng)病理學(xué)、神經(jīng)分子生物學(xué)等領(lǐng)域研究涼血通瘀方治療腦出血繼發(fā)性腦損害的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法:
　　1、選擇SPF級(jí)SD雄性大鼠，隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、造模組，按照自體尾動(dòng)脈血注射方法制備腦出血模型。根據(jù)行為學(xué)評(píng)分和腦組織形態(tài)學(xué)改變觀察造模情況。
　　2、造模組隨機(jī)分為模型組、涼血通瘀組、通腑瀉熱組和涼血散

2、瘀組，每組6只，分別于用藥1d、3d、5d后觀察相應(yīng)指標(biāo)。
　　3、觀察并記錄大鼠行為學(xué)評(píng)分、測(cè)定大鼠腦血腫含量及腦組織水腫含量以觀察涼血通瘀方對(duì)腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損的影響。
　　4、觀察大鼠排便情況、檢測(cè)腸道活力探討涼血通瘀方對(duì)腦出血大鼠腸道功能的影響。
　　5、應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)大鼠腦組織NGF、nNOS表達(dá)，應(yīng)用硝酸還原法測(cè)定大鼠腦組織NO含量，應(yīng)用WST-8法檢測(cè)大鼠腦組織和血清SOD含量、硫代巴比妥酸法檢測(cè)

3、大鼠腦組織和血清MDA含量。上述方法探討涼血通瘀方干預(yù)腦出血大鼠神經(jīng)修復(fù)及減輕腦損害的作用機(jī)制。
　　6、應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)大鼠腦、腸組織CCK-8蛋白表達(dá)，觀察涼血通瘀方對(duì)腦出血大鼠腦腸肽CCK-8的影響。
　　結(jié)果:
　　1、腦出血模型建立，造模組與正常組、假手術(shù)組比較均出現(xiàn)行為學(xué)評(píng)分明顯升高(P＜0.01)，腦組織形態(tài)學(xué)染色見類圓形血腫區(qū)。假手術(shù)組行為學(xué)評(píng)分為0分，未引起神經(jīng)功能缺損，腦組織形態(tài)學(xué)染色未見血腫區(qū)。

4、
　　2、行為學(xué)評(píng)分及腦組織血腫含量、含水量測(cè)定結(jié)果
　　2.1行為學(xué)評(píng)分:造模各組與正常組、假手術(shù)組比較均出現(xiàn)不同程度神經(jīng)功能缺損(P＜0.01)。隨時(shí)間推移，造模各組評(píng)分逐漸下降。用藥3d、5d涼血通瘀組Logna評(píng)分均低于模型組(P＜0.05)。用藥5d涼血通瘀組、通腑瀉熱組平衡木評(píng)分低于模型組(P＜0.05)。提示涼血通瘀方、通腑瀉熱方均能改善腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損情況，其中涼血通瘀方的效果更為明顯。
　　2.

5、2腦組織血腫含量測(cè)定，模型組和用藥組在1d血腫含量相似(P＞0.05);3d后涼血通瘀組血腫含量低于模型組腦(P＜0.05);5d涼血通瘀組、涼血散瘀組均低于模型組(P＜0.01，P＜0.05)，其中涼血通瘀組血腫減少更為明顯(P＜0.01)。提示涼血通瘀方、涼血散瘀方均可促進(jìn)血腫消散，涼血通瘀方效果更為明顯。
　　2.3腦組織含水量測(cè)定，用藥1d造模各組大鼠腦組織含水量均明顯高于假手術(shù)組(P＜0.01，P＜0.05)。3d模型組

6、大鼠含水量明顯高于假手術(shù)組(P＜0.01)，各用藥組腦含水量均明顯低于模型組(P＜0.01)，涼血通瘀組低于涼血散瘀組(P＜0.05)。5d后各用藥組含水量均明顯低于模型組(P＜0.01)，涼血通瘀組含水量低于通腑泄熱組和涼血散瘀組(P＜0.05，P＜0.01)。提示涼血通瘀方、通腑瀉熱方、涼血散瘀方均能不同程度減輕腦水腫，涼血通瘀方效果最明顯。
　　3、排便情況觀察及腸道功能檢測(cè)結(jié)果
　　3.1排便情況觀察，模型組大鼠排便

7、總粒數(shù)、黑便粒數(shù)均明顯少于假手術(shù)組(P＜0.01)，提示腦出血后出現(xiàn)排便減少。涼血通瘀組黑便所占百分比明顯高于模型組(P＜0.01)，且黑便粒數(shù)及所占百分比高于涼血散瘀組(P＜0.01)。通腑瀉熱組排便總粒數(shù)、黑便粒數(shù)及所占百分比均明顯高于模型組(P＜0.01)，且明顯高于涼血通瘀組和涼血散瘀組(P＜0.01)。提示涼血通瘀方、熟大黃均能促進(jìn)排便，改善腦出血后便秘情況，其中熟大黃單方排便作用更為明顯。
　　3.2腸道活力檢測(cè)，各時(shí)

8、間點(diǎn)正常組與假手術(shù)組腸段收縮頻次、振幅及腸道活力值均明顯高于模型組(P＜0.01)，提示腦出血后腸道活力下降。模型組和各用藥組腸道活力值在3d、5d后逐漸增加，涼血通瘀組腸道活力值增高明顯，通腑瀉熱組次之，兩組腸道活力值均高于模型組和涼血散瘀組(P＜0.05，P＜0.01)。提示涼血通瘀方、熟大黃均能增加腸道活力、促進(jìn)腸道蠕動(dòng)。
　　4、腦損傷修復(fù)及腦保護(hù)相關(guān)指標(biāo)(NGF、nNOS、NO、SOD、MDA)檢測(cè)結(jié)果
　　4.1

9、腦組織NGF表達(dá)，不同時(shí)間點(diǎn)涼血通瘀組NGF表達(dá)高于模型組、涼血散瘀組(P＜0.05，P＜0.01)，且在用藥3d高于通腑瀉熱組(P＜0.05)。提示涼血通瘀方可增強(qiáng)腦組織NGF表達(dá)。
　　4.2腦組織nNOS表達(dá)，各時(shí)間點(diǎn)模型組nNOS含量表達(dá)高于假手術(shù)組(P＜0.05)。3d涼血通瘀組nNOS含量表達(dá)低于模型組(P＜0.05)。5d涼血通瘀組、通腑瀉熱組和涼血散瘀組nNOS含量表達(dá)均低于模型組(P＜0.01，P＜0.05)。<

10、br>　　大鼠腦組織NO含量比較，用藥3d模型組明顯高于假手術(shù)組(P＜0.01);涼血通瘀組、通腑瀉熱組、涼血散瘀組明顯低于模型組(P＜0.01)。用藥5d涼血通瘀組、通腑瀉熱組明顯低于模型組(P＜0.01，P＜0.05)，其中涼血通瘀組NO含量最低(P＜0.05)。
　　上述結(jié)果提示各用藥組均可減輕nNOS表達(dá)、減少NO含量，涼血通瘀方效果最明顯。
　　4.3大鼠腦組織SOD活力比較，用藥1d、3d涼血通瘀組、通腑瀉熱組S

11、OD活力均高于模型組(P＜0.05，P＜0.01)。5d涼血通瘀組高于模型組(P＜0.05)。大鼠血清SOD酶活力比較，用藥3d涼血通瘀組高于模型組和涼血散瘀組(P＜0.05，P＜0.01)。提示涼血通瘀方、通腑瀉熱方均可增強(qiáng)SOD活力，涼血通瘀方效果更為明顯。
　　4.4大鼠腦組織MDA含量比較，涼血通瘀組在用藥1d、3d、5d均低于模型組(P＜0.05)。通腑瀉熱組在用藥1d、3d低于模型組(P＜0.05，P＜0.01)。涼血

12、散瘀組在3d明顯低于模型組(P＜0.05)。大鼠血清MDA含量比較:用藥3d涼血通瘀組、通腑瀉熱組均低于模型組(P＜0.01);5d各用藥組血清MDA含量均低于模型組(P＜0.05)。提示各用藥組均可減少過氧化物MDA含量，涼血通瘀方效果最為明顯。
　　5、腦組織、腸組織CCK-8表達(dá)結(jié)果
　　5.1腦組織CCK-8表達(dá)，用藥1d通腑瀉熱組、涼血散瘀組CCK-8表達(dá)高于假手術(shù)組、模型組(P＜0.01，P＜0.05)，其中通腑

13、瀉熱組表達(dá)最高，提示在1d通腑瀉熱方可明顯促進(jìn)血腫周圍CCK-8蛋白表達(dá)。用藥3d涼血通瘀組CCK-8表達(dá)最高(P＜0.05)。在5d各用藥組CCK-8表達(dá)均明顯高于模型組(P＜0.01)，其中涼血通瘀組最高(P＜0.05)。
　　5.2腸組織CCK-8表達(dá)，1d涼血通瘀組高于假手術(shù)組、模型組、涼血散瘀組(P＜0.05，P＜0.01)。3d涼血通瘀組最高，通腑瀉熱組次之，均高于假手術(shù)組、模型組和涼血散瘀組(P＜0.05，P＜0.0

14、1)。
　　結(jié)論:
　　1、腦出血大鼠自體尾動(dòng)脈血注入法造模成功。
　　2、涼血通瘀方、通腑瀉熱方均能改善腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損情況，其中涼血通瘀方的效果更為明顯。
　　3、涼血通瘀方和通腑瀉熱方均可促進(jìn)排便，增加腦出血大鼠腸道活力值，大黃制劑（通腑瀉熱組）具有更顯著的通便作用，二者皆可改善腦出血大鼠腸道功能障礙，增加腸道蠕動(dòng)。
　　4、涼血通瘀方、通腑瀉熱方、涼血散瘀方皆可不同程度降低繼發(fā)性腦損害相關(guān)指標(biāo)