表達(dá)下調(diào)的Talin1通過(guò)激活ERK1-2信號(hào)通路促進(jìn)肝細(xì)胞癌的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換、遷移及侵襲.pdf

1、Talin1是一種大分子的受體蛋白，連接細(xì)胞黏附分子(例如整合素intergrins，黏著斑激酶FAK，黏附斑蛋白vinculin)與細(xì)胞肌動(dòng)蛋白，并調(diào)控整合素和粘著斑信號(hào)通路(Iintergrins-FAK signaling)。一些研究表明，Talin1在一些腫瘤中高表達(dá)并且促進(jìn)它們的發(fā)生發(fā)展，包括前列腺癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌、多形形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及乳腺癌。然而，Talin1在肝細(xì)胞肝癌中（Hepatocellular carcinoma

2、，以下簡(jiǎn)稱HCC，肝癌）發(fā)生發(fā)展中的作用仍不明確及其作用機(jī)制仍是未知的。在本研究中，我們通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)Talin1在肝癌病程芯片中的表達(dá)水平，結(jié)果顯示Talin1在正常肝組織、肝硬化、肝增生、相應(yīng)的癌旁組織、原發(fā)肝癌組織及轉(zhuǎn)移灶中的高表達(dá)率分別是100％(5/5)，83.3％(5/6)，100％(2/2)，83.3％(15/18)，42.1％(8/19)及14.3％(1/7)，以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示著Talin1的表達(dá)隨著肝癌的發(fā)生

3、發(fā)展有逐漸下調(diào)的趨勢(shì);此外，和癌旁組織相比較，Talin1在原發(fā)肝癌組織(P＜0.05）及轉(zhuǎn)移組織(P＜0.01）中的表達(dá)顯著下調(diào)。進(jìn)一步，我們通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)了Talin1在196例癌旁組織及200例肝癌組織的表達(dá)水平，結(jié)果顯示Talin1在癌旁組織中的高表達(dá)率是67.5％，而在肝癌組織中的高表達(dá)率僅僅只有7.2％（P＜0.001）;通過(guò)Pearson's卡方檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)低表達(dá)的Talin1與肝癌患者的低齡(P=0.032)、大的

4、腫瘤大小(P=0.006)、高AFP水平(P=0.003)及腫瘤復(fù)發(fā)(P＜0.001)相關(guān);通過(guò)Kaplan-Meier及l(fā)og-rank檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Talin1低表達(dá)的肝癌患者相對(duì)于Talin1高表達(dá)的肝癌患者，其總生存時(shí)間(P＜0.001）及無(wú)病生存時(shí)間(P=0.001)更短;通過(guò)單因素及多因素分析發(fā)現(xiàn)Talin1的表達(dá)(P=0.010)是肝癌患者總生存的獨(dú)立預(yù)后因素。通過(guò)western blot試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Talin1在低度惡性的SK-H

5、ep-1及HepG2肝癌細(xì)胞株中相對(duì)于高度惡性的SMCC-7721、MHCC97H及HCCLM3肝癌細(xì)胞株中高表達(dá)，因此我們選擇該兩株細(xì)胞通過(guò)小干擾RNA技術(shù)(siRNA)來(lái)敲除Talin1的表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)Talin1敲除的SK-Hep-1及HepG2細(xì)胞發(fā)生了明顯的形態(tài)改變，由多角形或橢圓形細(xì)胞變成細(xì)長(zhǎng)成纖維樣的細(xì)胞，這被認(rèn)為是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換(Epithelial-mesenchymal transition，以下簡(jiǎn)稱為EMT)的主要特

6、征;在分子水平上，Talin1敲除的肝癌細(xì)胞中上皮標(biāo)志物E-cadherin的蛋白水平明顯下調(diào)，間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin、vimentin的蛋白水平明顯上調(diào)。此外，Talin1的敲除有利于肝癌細(xì)胞片狀偽足的生長(zhǎng)。通過(guò)Transwell遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Talin1敲除的肝癌細(xì)胞表現(xiàn)為顯著增強(qiáng)的遷移及侵襲能力（P均＜0.05）。在機(jī)制上，通過(guò)篩選信號(hào)通路發(fā)現(xiàn)Talin1敲除的肝癌細(xì)胞中p-ERK1/2的表達(dá)明顯上調(diào)，而p-smad2