TNFAIP2 通過激活Wnt-β-catenin 信號通路促進食管鱗狀細胞癌的遷移與增殖.pdf

1、背景：
　　食管癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，食管癌在我國發(fā)病率有明顯的地區(qū)差異，其發(fā)病率及死亡率均居高不下。食管癌在我國以鱗狀細胞癌常見，其具體發(fā)病原因及機制仍然不得而知。
　　腫瘤微環(huán)境在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著不可或缺的作用，而腫瘤壞死因子α（TNF-α）是腫瘤微環(huán)境中一個重要的炎癥因子，其可促進乳腺癌，結(jié)腸癌，膀胱癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展。TNF-α在食管鱗癌微環(huán)境中對食管鱗癌的具體作用的研究還未見報道，因此，我們對TNF-α

2、下游基因腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白2基因（TNFAIP2）在食管鱗癌中的表達情況進行檢測、研究?？赏麨槭彻馨┗蛑委煼矫嫣峁┛蛇x的靶點，為食管癌的臨床治療提供理論基礎(chǔ)與新的治療方式。
　　方法：
　　1.采用qRT-PCR及免疫組化技術(shù)分別檢測癌及癌旁組織中TNFAIP2在基因和蛋白層面的表達水平。
　　2.采用qRT-PCR篩選高表達靶基因的食管鱗癌細胞株，選擇兩株高表達靶基因的細胞株，通過上海吉凱基因科技有限公司在選定

3、的兩株細胞株中構(gòu)建低表達靶基因的shRNA慢病毒載體。實驗分組慢病毒介導(dǎo)RNA干擾組（LV-RNAi），空載體組（LV-CON）。
　　3.采用qRT-PCR和Western blot技術(shù)驗證靶基因在基因及蛋白層面的干擾效率。
　　4.采用重組人腫瘤壞死因子α（rTNF-α）藥物作用于選定的細胞株48小時，運用qRT-PCR及Western blot技術(shù)檢測靶基因的基因及蛋白表達水平。
　　5.運用克隆形成及CCK8方

4、法檢測各組細胞的增殖能力。
　　6.細胞周期。凋亡檢測（流式）。
　　7.細胞遷移及侵襲能力檢測（Transwell小室法）。
　　8.腫瘤細胞增殖、周期、遷移，侵襲相關(guān)蛋白表達水平檢測（Western blot）。
　　9.SPSS22.0進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.TNFAIP2在食管鱗癌及癌旁組織中，分別在基因及蛋白水平存在表達差異，且在癌組織中為高表達。
　　2.選定細胞株在基

5、因及蛋白水平的干擾效率超過75%。
　　3.采用rTNF-α作用后，靶基因及蛋白水平均表達增高。
　　4.克隆形成和CCK8結(jié)果提示：LV-RNAi組較LV-CON組能抑制細胞增殖；細胞周期、凋亡結(jié)果提示：LV-RNAi組較LV-CON組，明顯抑制細胞處于G0/G1期，但對細胞凋亡無影響；遷移、侵襲結(jié)果顯示：干擾組較對照組能抑制癌細胞的遷移。侵襲能力。
　　5.檢測到Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)蛋白在LV-R

6、NAi組較LV-CON組表達降低或增高。
　　結(jié)論：
　　本實驗首次證實TNFAIP2在食管鱗癌中呈高表達狀態(tài)，并證實rTNF-α細胞因子可促進食管鱗癌細胞株在基因及蛋白水平高表達靶基因及產(chǎn)物。通過慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)，證實低表達TNFAIP2對食管鱗癌細胞株的生物學(xué)功能產(chǎn)生明顯影響：抑制腫瘤細胞的增殖、遷移、侵襲。
　　對于TNFAIP2對食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及生物學(xué)功能影響的進一步探究，得出TNFAIP2可能