長鏈非編碼RNAMEG3在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：研究人類長鏈非編碼RNA MEG3（Maternally expressed gene3）在胰腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。
　　方法：通過全基因合成的方法人工合成MEG3基因全長，構(gòu)建pcDNA3.0-MEG3重組質(zhì)粒。將上述重組質(zhì)粒導(dǎo)入人胰腺導(dǎo)管細(xì)胞癌SW1990細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞記為MEG3-SW1990，采用RT-PCR及熒光定量PCR檢測MEG3在轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞中mRNA的表達(dá)，采用MTT法及平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)

2、胞的增殖效率，采用transwell遷移實(shí)驗(yàn)及Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的遷移及侵襲功能的變化，采用流式細(xì)胞儀法檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的凋亡率的變化，采用Western-Blot法檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞中p53蛋白的表達(dá)水平的改變。使用含5-氮雜-2-脫氧胞苷的培養(yǎng)基培養(yǎng)SW1990細(xì)胞，RT-PCR檢測經(jīng)處理的細(xì)胞中MEG3 mRNA的表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：RT-PCR及熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)在SW1990細(xì)胞中幾乎無M

3、EG3 mRNA的表達(dá)，而在MEG3-SW1990細(xì)胞中MEG3 mRNA的表達(dá)明顯增高。MTT及平板克隆實(shí)驗(yàn)表明MEG3-SW1990細(xì)胞的增殖效率較SW1990細(xì)胞明顯降低。通過transwell遷移實(shí)驗(yàn)及Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)MEG3-SW1990細(xì)胞的遷移能力及侵襲能力較SW1990細(xì)胞無明顯差異。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測，MEG3-SW1990細(xì)胞較SW1990細(xì)胞的凋亡率增加。Western-Blot檢測表明MEG3-SW19