EF24對重癥急性胰腺炎大鼠肺損傷作用的研究.pdf

1、急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是由多種病因引起的胰酶激活，以胰腺局部炎癥為主要特點，伴或者不伴有其他器官功能障礙的疾病，重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)須伴有持續(xù)性的器官衰竭，按照亞特蘭大分類標準，約10％急性胰腺炎患者歸為嚴重分級，病死率較高，急性肺損傷是急性胰腺炎的一個嚴重的并發(fā)癥，在 SAP中，急性肺損傷和急性呼吸窘迫綜合征的死亡率為30%~40%，目前對于

2、SAP相關(guān)性肺損傷沒有特效的治療方法。
　　核因子-κB(Nuclear factor-κB, NF-κB)是一個中心轉(zhuǎn)錄因子，NF-κB家族由 P50,P52,REL,P65和 REL-B組成，控制著多種炎癥基因的表達，例如腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)和誘導型一氧化氮合酶。水通

3、道蛋白是一種小的膜蛋白，選擇性和雙向通過細胞膜快速促進水的轉(zhuǎn)運，通過AQP5可以反應(yīng)肺組織水的轉(zhuǎn)運情況，進而反應(yīng)肺水腫的嚴重程度。姜黃素是一種植物多酚，由姜科植物黃色香料中提取。調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子如NF-κB，粘附分子，酶等，在炎癥和癌癥中具有重要作用，聯(lián)苯二氟酮EF24是一種合成的姜黃素的類似物，研究發(fā)現(xiàn)姜黃素類似物EF24可以抑制NF-κB活性，減少促炎癥細胞因子TNF-α、IL-6 mRNA表達和分泌，在炎癥反應(yīng)中起作用。研究顯示在大鼠

4、出血性休克模型中給予聯(lián)苯二氟酮EF24治療，能夠抑制IL-1受體通路，減少血清中TNF-α、IL-6濃度，減少出血性休克引起的肺炎癥。本實驗研究目的是探索聯(lián)苯二氟酮EF24對重癥胰腺炎的肺損傷的炎癥抑制作用。
　　目的：本實驗旨在通過 HE染色觀察SAP時胰腺、肺組織組織學的變化，檢測肺濕干重比，瑞氏染色觀察肺泡灌洗液細胞計數(shù)，Real-Time PCR、Western-blot方法檢測肺AQP5 mRNA、p65 mRNA及蛋白

5、表達， ELISA方法測定血清 TNF-α、IL-6、肺泡灌洗液中 TNF-α水平，探索聯(lián)苯二氟酮EF24對重癥胰腺炎肺損傷的作用，為治療重癥急性胰腺炎肺損傷提供新的方法。
　　方法：
　　1.將60只Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分成對照組(CON組)、重癥急性胰腺炎組(SAP組)和聯(lián)苯二氟酮EF24組(EF24組)，每組再分為6h、12h2個亞組，每組大鼠各10只。
　　2.重癥急性胰腺炎 SAP組、

6、聯(lián)苯二氟酮 EF24組大鼠分別給予間隔1h，共2次，每次腹腔內(nèi)注射同等劑量的20% L-精氨酸(3.0 g/kg)；對照CON組大鼠給予間隔1h，共2次，每次腹腔內(nèi)注射與L-精氨酸同等劑量的0.9%NaCl；造模成功后1h，聯(lián)苯二氟酮EF24組大鼠給予腹腔內(nèi)注射聯(lián)苯二氟酮EF24(0.4 mg/kg)；CON組、SAP組大鼠給予腹腔內(nèi)注射聚乙二醇400溶劑(聚乙二醇：NaCl=1:1)。
　　3.分別于造模后6h、12h留取胰腺組

7、織、肺組織和血液，通過HE染色觀察胰腺、肺的組織學變化，留取肺組織標本，檢測肺濕干重比，瑞氏染色觀察肺泡灌洗液中細胞計數(shù)，ELISA法檢測血清內(nèi) IL-6、TNF-α水平及檢測肺泡灌洗液中 TNF-α水平，采用 Real-Time PCR、Western-blot的方法檢測比較三組肺組織AQP5 mRNA、p65 mRNA及蛋白的表達變化。
　　4.所有計量數(shù)據(jù)資料采用(mean±SD)表示，利用SPSS21.0軟件包行統(tǒng)計分析。

8、P＜0.05為差異顯著，具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1.HE染色：結(jié)果示SAP組、EF24組分別與CON組比較，胰腺組織損傷嚴重程度增加，并且隨著時間發(fā)展，胰腺損傷逐漸加重。依據(jù)Mayer、Osman等評分標準，肺組織病理評分結(jié)果顯示SAP組、EF24組的肺組織病理損傷加重，其中EF24組肺組織損傷程度較SAP組減輕；
　　2.肺濕干重比：統(tǒng)計結(jié)果顯示：SAP組、EF24組分別與 CON組各個時間點相比，肺濕干重

9、比明顯升高，具有統(tǒng)計學差別(均為 P＜0.01)；EF24組與SAP組各個時間點相比，肺濕干重比顯著降低，具有統(tǒng)計學差別(P＜0.01)；各組中兩個亞組相比，CON組兩個亞組相比，肺濕干重比無明顯差異(P＞0.05)，在 SAP組、EF24組中，12h組肺濕干重比比6h肺濕干重比顯著升高，具有統(tǒng)計學差別(分別P＜0.01，P＜0.05)；
　　3.肺泡灌洗液細胞計數(shù)：統(tǒng)計結(jié)果顯示：SAP組、EF24組各個時間點分別與CON組各個時

10、間點相比較，肺泡灌洗液總細胞計數(shù)明顯升高，具有統(tǒng)計學意義(均為 P＜0.01)；EF24組與 SAP組各個時間點相比較，EF24組肺泡灌洗液總細胞計數(shù)降低，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；各個組的兩個亞組相比，CON組6h組、12h組肺泡灌洗液細胞總數(shù)計數(shù)無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，SAP組、EF24組12h組肺泡灌洗液細胞總數(shù)計數(shù)高于6h組，具有統(tǒng)計學差異(均為P＜0.01)；SAP組、EF24分別與CON組各個時間點相比較，肺

11、泡灌洗液巨噬細胞、淋巴細胞計數(shù)顯著高于CON組(均為P＜0.01)，EF24組與SAP相比較，肺泡灌洗液中巨噬細胞、淋巴細胞明顯減少，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；
　　4.血清IL-6的水平：SAP組、EF24組分別與CON組各個時間點相比較，SAP組、EF24組血清IL-6水平顯著升高(均為P＜0.01)；EF24組與SAP組各個時間點相比，血清IL-6水平顯著下降，具有統(tǒng)計學差別(P＜0.01)；CON組、EF24組兩個亞

12、組之間相比，6h、12h兩個時間點之間均無顯著差異(均為P＞0.05)，SAP組6h、12h兩個時間點相比，12h血清IL-6水平明顯高于6h組，有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)；
　　5.血清TNF-α的水平：SAP組、EF24組分別與CON組各個時間點比較，大鼠血清TNF-α濃度顯著升高，具有統(tǒng)計學差別(均為P＜0.01)；EF24組與SAP組各個時間點相比，EF24組明顯下降,具有統(tǒng)計學差別(P＜0.01)；三個組的兩個亞組之間

13、相比，CON組、EF24組6h、12h兩個亞組無顯著差異(均為P＞0.05)，SAP組12h組顯著高于6h組，具有統(tǒng)計學差別(P＜0.01)；
　　6.肺泡灌洗液TNF-α的水平：SAP組、EF24組分別與CON組各個時間點相比較，SAP組、EF24組肺泡灌洗液TNF-α的水平明顯升高，具有統(tǒng)計學差別(均為P＜0.01)；EF24組與 SAP組各個時間點相比，EF24組明顯下降,具有統(tǒng)計學差別(P＜0.01)；三個組的亞組相比較，

14、其中CON組、EF24組6h、12h組的肺泡灌洗液TNF-α水平無統(tǒng)計學差異(均為P＞0.05)，SAP組的6h、12h相比較，12h肺泡灌洗液TNF-α水平明顯高于6h肺泡灌洗液TNF-α水平,具有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)；
　　7.肺組織AQP5蛋白表達：SAP組、EF24組分別與CON組各個時間點相比較，SAP組、EF24組肺組織AQP5蛋白量均明顯降低(均為P＜0.01)，具有統(tǒng)計學差別；EF24組與SAP組各個時間點相

15、比，AQP5蛋白量明顯上升(P＜0.01)，具有統(tǒng)計學差別；CON組、EF24組6h、12h AQP5蛋白表達量無統(tǒng)計學差別(均為P＞0.05)，SAP組兩個亞組相比，6h AQP5蛋白表達的量明顯高于12h AQP5蛋白表達的量，具有統(tǒng)計學差別(P＜0.05)；
　　8.肺組織p65蛋白表達：SAP組、EF24組分別與CON組各個時間點相比，SAP組、EF24組肺組織p65蛋白量均顯著升高(均為P＜0.01)，具有統(tǒng)計學差別；E

16、F24組與SAP組各個時間點相比，EF24組p65蛋白表達顯著下降(P＜0.01)；三個組的亞組相比，CON組、EF24組6h、12h p65蛋白表達無統(tǒng)計學差別(均為P＞0.05)，SAP組兩個亞組相比，12h組 p65蛋白表達的量明顯高于6h組，具有統(tǒng)計學差別(P＜0.01)；
　　9.肺組織AQP5mRNA表達：SAP組、EF24組分別與CON組各個時間點相比較，SAP組、EF24組AQP5 mRNA表達的量較CON組明顯下

17、降(均為P＜0.01)，具有統(tǒng)計學差別；EF24組與SAP組各個時間點比較， AQP5 mRNA表達的量明顯升高，有的統(tǒng)計學差別(P＜0.01)；CON組、EF24組6h、12h相比，AQP5 mRNA表達量無統(tǒng)計學差異(均為P＞0.05)， SAP組兩個時間點相比，6h AQP5 mRNA的量明顯高于12h AQP5 mRNA的量，具有統(tǒng)計學差別(P＜0.05)；
　　10.肺組織p65 mRNA表達：SAP組、EF24組分別與

18、CON組各個時間點相比，SAP組、EF24組p65 mRNA表達量明顯升高，具有統(tǒng)計學差別(均為P＜0.01)；EF24組與SAP組各個時間點相比，EF24組p65 mRNA的量明顯減少，有統(tǒng)計學差別(P＜0.01)；三組的各個亞組之間相比較， CON組、EF24組p65 mRNA量6h、12h時間點相比，p65 mRNA表達量無顯著差異(P＞0.05)，SAP組6h、12h時間點相比，12h肺組織p65 mRNA的表達量明顯高于6h