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文檔簡介
1、目的:
晚期非小細(xì)胞肺癌的標(biāo)準(zhǔn)一線治療方案中,以鉑類為主或聯(lián)合鉑類的方案仍占較高比例,但與其他化療藥物聯(lián)用時,極易引發(fā)嚴(yán)重的不良反應(yīng),包括腎毒性,胃腸道反應(yīng),耳毒性及血液系統(tǒng)毒性等。本研究以卡鉑聯(lián)合吉西他濱作為參照,通過多種體外實驗,研究青蒿琥酯單藥聯(lián)合鉑類化療藥物卡鉑對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 A549細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期的作用,旨在探討青蒿琥酯聯(lián)合卡鉑應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌治療的可行性,為尋找新的臨床治療非小細(xì)胞肺癌化療方案提供科
2、學(xué)的實驗依據(jù)。
方法:
1.應(yīng)用MTT法初步測定青蒿琥酯(Artesunate,ART),卡鉑(Carboplatin,CBP),吉西他濱(Gemcitabine,Gem)抑制 A549細(xì)胞增殖的半數(shù)抑制濃度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。
2.選擇低毒單藥劑量(抑制率≤30%的單藥濃度),作為聯(lián)合用藥實驗濃度,應(yīng)用 MTT法測定青蒿琥酯聯(lián)合卡鉑,吉
3、西他濱聯(lián)合卡鉑對 A549細(xì)胞增殖的影響。繼而評估聯(lián)合用藥組的作用類型,為后續(xù)實驗選定藥物分組(①ART單藥組,②CBP單藥組,③Gem單藥組,④ART+CBP聯(lián)合用藥組,⑤Gem+CBP聯(lián)合用藥組)。
3.采用平板克隆形成實驗觀察三種低劑量單藥及聯(lián)合用藥后對A549細(xì)胞克隆增殖能力的影響。
4.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測上述各組藥物對A549肺癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響。
5.采用Tunel法觀察各組藥物對A54
4、9細(xì)胞凋亡形態(tài)的改變。
6.應(yīng)用Western Blot技術(shù)檢測上述選定藥物分組對 A549凋亡相關(guān)蛋白(Bax、Bcl-2、P53、Casepase-3)的表達(dá)水平的影響及ART單藥組,CBP單藥組,ART+CBP聯(lián)合用藥組對 A549在 G2/M期相關(guān)蛋白(CyclinB1、P21、P34)的表達(dá)水平的影響。
結(jié)果:
1.青蒿琥酯抑制A549細(xì)胞體外增殖,且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性,經(jīng) SPSS22.0計算
5、,IC50為22.3μg/ml。低劑量青蒿琥酯與卡鉑聯(lián)合應(yīng)用,對A549的增殖抑制作用具有協(xié)同或相加效應(yīng)。
2.青蒿琥酯及卡鉑單藥對A549細(xì)胞克隆形成率較對照組分別降低了15.7%,29.3%,ART聯(lián)合CBP對A549的克隆形成率則顯著降低了40.8%。
3.青蒿琥酯單藥主要誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生早期凋亡,與CBP聯(lián)合作用后,與單藥組相比,能誘導(dǎo)更多的細(xì)胞凋亡,且凋亡細(xì)胞主要處于凋亡早期。
4.青蒿琥酯單藥將A5
6、49細(xì)胞周期阻滯在G2/M期,卡鉑單藥阻滯在S期,兩藥聯(lián)合作用時在G2/M期細(xì)胞比例較陰性對照組有明顯增加。
5.Tunel鏡檢結(jié)果可見:ART單藥組及ART+CBP聯(lián)合用藥組與對照組細(xì)胞相比,可見明顯凋亡細(xì)胞,形態(tài)見核固縮,邊聚較為明顯。
6.Western Blot結(jié)果顯示:與對照組相比,ART+CBP組中促凋亡蛋白Bax、P53、caspase-3的表達(dá)顯著升高,凋亡抑制相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)明顯降低;G2/
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