青蒿琥酯聯(lián)合卡鉑對非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期的作用.pdf

1、目的：
　　晚期非小細(xì)胞肺癌的標(biāo)準(zhǔn)一線治療方案中，以鉑類為主或聯(lián)合鉑類的方案仍占較高比例，但與其他化療藥物聯(lián)用時，極易引發(fā)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，包括腎毒性，胃腸道反應(yīng)，耳毒性及血液系統(tǒng)毒性等。本研究以卡鉑聯(lián)合吉西他濱作為參照，通過多種體外實驗，研究青蒿琥酯單藥聯(lián)合鉑類化療藥物卡鉑對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 A549細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期的作用，旨在探討青蒿琥酯聯(lián)合卡鉑應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌治療的可行性，為尋找新的臨床治療非小細(xì)胞肺癌化療方案提供科

2、學(xué)的實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.應(yīng)用MTT法初步測定青蒿琥酯（Artesunate，ART）,卡鉑（Carboplatin，CBP），吉西他濱（Gemcitabine，Gem）抑制 A549細(xì)胞增殖的半數(shù)抑制濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）。
　　2.選擇低毒單藥劑量（抑制率≤30％的單藥濃度），作為聯(lián)合用藥實驗濃度，應(yīng)用 MTT法測定青蒿琥酯聯(lián)合卡鉑，吉

3、西他濱聯(lián)合卡鉑對 A549細(xì)胞增殖的影響。繼而評估聯(lián)合用藥組的作用類型，為后續(xù)實驗選定藥物分組（①ART單藥組，②CBP單藥組，③Gem單藥組，④ART+CBP聯(lián)合用藥組,⑤Gem+CBP聯(lián)合用藥組）。
　　3.采用平板克隆形成實驗觀察三種低劑量單藥及聯(lián)合用藥后對A549細(xì)胞克隆增殖能力的影響。
　　4.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測上述各組藥物對A549肺癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響。
　　5.采用Tunel法觀察各組藥物對A54

4、9細(xì)胞凋亡形態(tài)的改變。
　　6.應(yīng)用Western Blot技術(shù)檢測上述選定藥物分組對 A549凋亡相關(guān)蛋白（Bax、Bcl-2、P53、Casepase-3）的表達(dá)水平的影響及ART單藥組，CBP單藥組，ART+CBP聯(lián)合用藥組對 A549在 G2/M期相關(guān)蛋白（CyclinB1、P21、P34）的表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果：
　　1.青蒿琥酯抑制A549細(xì)胞體外增殖，且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性，經(jīng) SPSS22.0計算

5、，IC50為22.3μg/ml。低劑量青蒿琥酯與卡鉑聯(lián)合應(yīng)用，對A549的增殖抑制作用具有協(xié)同或相加效應(yīng)。
　　2.青蒿琥酯及卡鉑單藥對A549細(xì)胞克隆形成率較對照組分別降低了15.7%，29.3%，ART聯(lián)合CBP對A549的克隆形成率則顯著降低了40.8%。
　　3.青蒿琥酯單藥主要誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生早期凋亡，與CBP聯(lián)合作用后，與單藥組相比，能誘導(dǎo)更多的細(xì)胞凋亡，且凋亡細(xì)胞主要處于凋亡早期。
　　4.青蒿琥酯單藥將A5

6、49細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，卡鉑單藥阻滯在S期，兩藥聯(lián)合作用時在G2/M期細(xì)胞比例較陰性對照組有明顯增加。
　　5.Tunel鏡檢結(jié)果可見：ART單藥組及ART+CBP聯(lián)合用藥組與對照組細(xì)胞相比，可見明顯凋亡細(xì)胞，形態(tài)見核固縮，邊聚較為明顯。
　　6.Western Blot結(jié)果顯示：與對照組相比，ART+CBP組中促凋亡蛋白Bax、P53、caspase-3的表達(dá)顯著升高，凋亡抑制相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)明顯降低；G2/