MADD在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其對(duì)A549細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、肺癌是我國最常見的呼吸道惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率均占惡性腫瘤的首位。在肺癌患者中，約30％的非小細(xì)胞肺癌可以行手術(shù)切除治療，但術(shù)后5年存活率不足10％，生活質(zhì)量也不高，而晚期不能手術(shù)的患者只能采用常規(guī)化療或放療，其不但毒副作用大，療效也不理想。因此，尋找新的有效的治療手段對(duì)非小細(xì)胞肺癌的治療具有很重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　 腫瘤壞死因子相關(guān)死亡配體（TRAIL）是腫瘤壞死因子家族成員，研究發(fā)現(xiàn)其在體內(nèi)外均表現(xiàn)出良好的抗腫瘤效果，且

2、對(duì)正常組織細(xì)胞幾乎無任何影響。目前，對(duì)TRAIL信號(hào)途徑的關(guān)注主要集中在腫瘤治療上，已有多種針對(duì)TRAIL信號(hào)途徑的重組TRAIL蛋白制劑、死亡受體抗體等藥物進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗(yàn)階段，并取得了不錯(cuò)的效果。TRAIL聯(lián)合其它抗腫瘤治療方法亦在增強(qiáng)癌細(xì)胞藥物敏感性、抑制癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移中表現(xiàn)出很好的效果。但多種腫瘤對(duì)TRAIL有固有性或獲得性耐受，限制了其在腫瘤治療中的應(yīng)用。有絲分裂原激酶活化死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(MADD)是IG20基因編碼的6種

3、蛋白亞型之一，研究證明其在多種腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)，與腫瘤細(xì)胞的TRAIL耐受性有關(guān)，因此MADD被認(rèn)為是逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞TRAIL耐受的潛在的分子靶點(diǎn)。截至目前，關(guān)于MADD在正常肺組織與肺癌組織中表達(dá)差異及其作用的研究還未見報(bào)道，因此本研究觀察了MADD在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)，并探討了MADD對(duì)肺腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　 實(shí)驗(yàn)方法:
　　 1.免疫組化法檢測正常肺組織與肺癌組織中MADD的表達(dá);
　　 2

4、.逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測肺腺癌細(xì)胞A549中IG20基因的表達(dá);
　　 3.質(zhì)粒擴(kuò)增;
　　 4.慢病毒包裝、滴度測定及病毒顆粒擴(kuò)增;
　　 5.Lipofectamine2000脂質(zhì)體法或慢病毒載體感染法將外源質(zhì)?；蚵《据d體導(dǎo)入A549細(xì)胞;
　　 6.Westernblot法檢測A549細(xì)胞處理前后MADD表達(dá)水平變化;
　　 7.MTT實(shí)驗(yàn)檢測A549細(xì)胞處理前后細(xì)胞增殖狀況變化;
　　

5、 8.AnnexinV/FITC雙染實(shí)驗(yàn)檢測A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒或感染慢病毒載體后細(xì)胞凋亡水平。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1.正常肺組織、肺鱗癌及腺癌組織細(xì)胞胞漿內(nèi)均有MADD表達(dá)，表達(dá)水平的高低依次為肺腺癌組織、肺鱗癌組織、正常肺組織;
　　 2.肺腺癌A549細(xì)胞中可表達(dá)IG20的四種蛋白異型體，其分別為IG20、MADD、IG20-SV2和DENN-SV;
　　 3.獲得足量的高純度轉(zhuǎn)染用質(zhì)粒;

6、r>　　 4.慢病毒有效包裝及擴(kuò)增;
　　 5.質(zhì)粒和慢病毒載體可被有效轉(zhuǎn)入A549細(xì)胞;
　　 6.A549細(xì)胞內(nèi)MADD表達(dá)顯著增高或受抑制;
　　 7.MADD高表達(dá)可促進(jìn)A549細(xì)胞增殖，低表達(dá)可抑制A549細(xì)胞增殖;
　　 8.MADD高表達(dá)可抑制A549細(xì)胞凋亡，低表達(dá)可促進(jìn)A549細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)論:
　　 本研究發(fā)現(xiàn)較肺正常組織，MADD在非小細(xì)胞肺癌組織中過表達(dá)。M