青蒿琥酯對表皮鱗癌a431細胞增殖和凋亡的影響

1、青蒿琥酯青蒿琥酯對表皮鱗癌對表皮鱗癌A431細胞增殖和凋細胞增殖和凋亡的影響亡的影響江忠勇梅峰于彬韓鵑田衍平李世峰周德山(第三軍醫(yī)大學基礎部組胚教研室重慶400038)摘要：：目的初步探討青蒿琥酯(ArtesunateART)對表皮鱗癌細胞生長和凋亡的影響及其相關機制。方法方法以人表皮鱗癌A431細胞系和永生化角質(zhì)形成細胞HaCaT細胞系為研究對象，順鉑（DDP）為陽性對照，通過MTT法和流式細胞術觀察ART對A431和HaCaT細胞增

2、殖和凋亡的影響和去鐵敏（DFOM）的阻斷效果。結果結果ART對癌細胞具有較明顯的殺傷作用而對永生化的正常角質(zhì)形成細胞的損害顯著低于DDP。ART能夠誘導A431凋亡，其凋亡率為（19.87%0.03）%，加入DFOM后，ART誘導的腫瘤細胞凋亡率下降至（7.37%0.02）%。流式細胞術檢測細胞周期發(fā)現(xiàn)ART主要使A431積聚于S期[(67.6%4.12)%P0.05]。結論ART可能通過誘導癌細胞A431凋亡發(fā)揮抑制其生長的作用，且在

3、一定范圍內(nèi)與藥物劑量呈正相關，這種作用與Fe2介導有關。因ART對正常細胞的殺傷作用明顯低于毒副作用明顯低于DDP，所以，可能更具臨床應用前景。關鍵詞關鍵詞：青蒿琥酯；皮膚癌；A431；細胞凋亡作者簡介；江忠勇，男，重慶市人，碩士，主要從事腫瘤發(fā)生機制研究。電話；（023）68752229。通訊作者；周德山，電話（023）68775266，email:dszhou2000@Theproliferationapoptosisofepide

4、rmalSquamouscelllinesA431affectedbyArtesunateJIANGzhongyongMEIfengYUNbinHANjuanTIANyanping，LIshifeng，ZHOUdeshan.（DepartmentofHistologyEmbryologyCollegeofMedicineThirdMilitaryMedicalUniversityChongqing400038China）Abstract

5、:ObjevectToinvestigatetheeffectsthatgrowthapoptosisofepidermalcarcinomacellaffectedbyArtesunate(ART)itsmechanism.Methods:ThegrowthinhibitionapoptosiscellcyclesofA431(acelllineofmalignantepidermalcarcinoma)HaCaT(anmalkera

6、tinocytecellline)weredetectedwithMTTFCM.Cisplatin(DDP)wasaspositivecontrol.DFOM(deferoxaminemesylate)wasusedtoblocktheroleofART.Results:ARTcouldinhibitA431growthseminhibitionratiois60umolL.TheresultsshowedthatARTcouldpar

7、tlyinduceA431cellapoptosistheratioofapoptosis（19.87%0.03）%butpretreatmentwiththeDFOM(60umolL)theratioofapoptosiswasdecresedto（7.37%0.02）%ComparingwithDDPtheARTwaslowtoxicantfHaCaT.ThecellcyclewasmeasuredbyFCMtheA431cells

8、weremainlystoppedtoSphasereachingto（67.6%4.12）%(P0.05comparedwithcontrol).Conclusion:ARTislowtoxicanthighperfmancefepidermalcarcinomacellA431.TheapoptosisinducedbyARTwaspartlydependedonFe2.OurresultsindicatedthatARTmaypo

9、ssessapotentialdemintreatmentofhumanepidermalcarcinoma.Keywd:ArtesunatecancerSquamouscellA431apotosis低血清(0.1%)培養(yǎng)基條件下藥物作用48h，吸去培養(yǎng)液，換200μl無血清DMEM并加入20μl的MTT(5mg／m1)，輕振培養(yǎng)板，放回CO2孵箱繼續(xù)培養(yǎng)4h后，棄上清液，加DMSO150l孔，振蕩5～10min?？瞻渍{(diào)零，酶標儀檢測

10、每孔570nm處的OD值，并計算藥物對細胞抑制率，重復3次。細胞生長抑制率=（1實驗組吸光度值／對照組吸光度值）100%1.4形態(tài)學觀察60μmolLART處理腫瘤細胞A431100μmolLART處理永生化細胞系HaCaT48h光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)，臺盼藍活細胞染色計數(shù)。1.5細胞周期檢測1.5.1步驟實驗分組：對照組（不加藥物），60μmolLART處理腫瘤細胞A431以及去鐵敏60μmolL4小時預處理組100μmolLART處

11、理永生化細胞系HaCaT以及去鐵敏60μmolL4小時預處理組48h.細胞培養(yǎng)及處理同上，收集各組細胞，用300l的PBS重懸細胞，將細胞逐滴加入700l預冷的無水乙醇中，乙醇終濃度為70%，4℃避光固定48h；3500rmin離心5min，棄上清；PBS清洗兩次；用500l含100unitmlRNaseA的PBS重懸細胞，37℃避光孵育30min；加2mgmlPI至終濃度50gml，避光孵育30min，流式細胞儀計數(shù)細胞周期各期的細胞

12、數(shù)目。1.1.2試劑DMEM高糖(美國Hyclone)，標準胎牛血清(天津TBD)，順鉑(Sigma)，臺盼藍(Sigma)，MTT(Sigma)，DMSO(Sigma)，AnnexinVFITC細胞凋亡試劑盒（北京晶美）碘化丙啶（PI，Sigma），RNaseA（Sigma），去鐵敏（DFOM，Sigma）。1.1.3設備和儀器酶標儀(BIORADmodel680)，流式細胞儀(美國BDFACSCalibur)1.2細胞培養(yǎng)用含10%