雷公藤內(nèi)酯醇誘導(dǎo)人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討雷公藤內(nèi)酯醇（Triptolide，TPL）對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖的抑制作用及促A549細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制，為雷公藤內(nèi)酯醇治療非小細(xì)胞肺癌提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：1、以A549細(xì)胞為細(xì)胞模型，采用MTT法測(cè)定不同濃度不同時(shí)間TPL對(duì)A549細(xì)胞的增殖抑制作用。2、采用瓊脂糖凝膠電泳法（DNA ladder法）、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)熒光染色法檢測(cè)A549凋亡。3、采用Caspase-3活性檢測(cè)

2、法分析TPL促A549細(xì)胞凋亡機(jī)制。4、采用逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)A549細(xì)胞Survivin mRNA的水平，分析其凋亡調(diào)控途徑。
　　 結(jié)果：1、在濃度6.25-100ng/ml、時(shí)間12-48h檢測(cè)范圍內(nèi)，TPL對(duì)A549細(xì)胞增殖抑制作用同對(duì)照組相比具有顯著差異（p<0.05）。2、DNA ladder法檢測(cè)到DNA梯狀條帶，證明A549細(xì)胞凋亡的發(fā)生；AO/EB熒光染色法檢測(cè)到凋亡細(xì)胞特異性形態(tài)學(xué)改

3、變，且48h內(nèi)凋亡率隨著時(shí)間延長(zhǎng)而增加（p<0.05）。3、TPL激活Caspase-3，48h內(nèi)Caspase-3活性較對(duì)照組有顯著提高（p<0.05），12h處活性最大；TPL濃度6.25-100ng/ml內(nèi)，Caspase-3活性升高，并具有濃度依賴性（p<0.05）。4、TPL顯著抑制A549細(xì)胞Survivin mRNA水平（p<0.05）。5、Survivin mRNA水平與Caspase-3活性呈負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)