1,25(OH)2D3對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維滑膜細(xì)胞IL-22介導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成可能機(jī)制的研究.pdf

1、背景：類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis,RA）是一種常見(jiàn)的慢性自身免疫性疾病，主要表現(xiàn)為滑膜炎和不可逆骨破壞。破骨細(xì)胞是參與RA關(guān)節(jié)破壞的主要細(xì)胞，而RANKL的分泌增加是破骨細(xì)胞分化的必要條件。1,25(OH)2D3是人體內(nèi)的活性維生素D，在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、影響骨代謝方面發(fā)揮著重要作用。而RA患者中普遍存在著1,25(OH)2D3的缺乏。RA滑膜表達(dá)的IL-22具有促炎和骨質(zhì)破壞作用，IL-22的可通過(guò)JAK-

2、2/STAT-3和p38 MAPK/NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)RANKL的表達(dá)，進(jìn)而影響破骨細(xì)胞的形成。我們前期研究發(fā)現(xiàn)1,25(OH)2D3可降低RA中IL-22的水平，并且呈劑量依賴性的下調(diào)RANKL的表達(dá)。于是我們推測(cè)1,25(OH)2D3可能通過(guò)阻斷“IL-22→JAK-2/STAT-3和p38 MAPK/NF-κB”信號(hào)途徑，抑制RA破骨細(xì)胞的形成。
　　目的：⑴研究1,25(OH)2D3在RA中的作用；⑵研究1,25(O

3、H)2D3是否通過(guò)阻斷“IL-22→JAK-2/STAT-3和p38 MAPK/NF-κB”信號(hào)途徑，抑制RA患者破骨細(xì)胞的形成。
　　方法：①回顧性分析1,25(OH)2D3在RA中的作用；②從RA患者的滑膜組織中分離培養(yǎng)FLS至4-6代，從健康志愿者外周血中分離MN（單核細(xì)胞），均加入M-CSF（25ng/mL）預(yù)處理；3d后，將兩者共培養(yǎng)，同時(shí)按分組加入RANKL（30ng/mL），M-CSF（25ng/mL），IL-22（

4、10ng/mL），1,25(OH)2D3（1nM），信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白抑制劑等藥物，分為以下五組：a組：MN+M-CSF+RA-FLS+1,25(OH)2D3+IL-22； b組：MN+M-CSF+RA-FLS+1,25(OH)2D3+I L-22+PD9805（MEK-1通路抑制劑）；c組：MN+M-CSF+RA-FLS+1,25(OH)2D3+I L-22+parthenolid（NF-κB抑制劑）；d組：MN+M-CSF+RA-FLS；

5、e組：MN+M-C SF+RA-FLS+RANKL。在共培養(yǎng)14天后處理，固定玻片上細(xì)胞并行TRAP染色，觀察破骨細(xì)胞生成的情況；用Real-time PCR檢測(cè)所加藥物對(duì)破骨細(xì)胞表面的標(biāo)志物TRAP、組織蛋白酶K、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-9 mRNA的表達(dá)的影響。③數(shù)據(jù)分析采用SPSS17.0軟件。
　　結(jié)果：⑴RA組血清水平低于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(15.67±7.27ng/ml與(20.08±7.14)ng/ml

6、，t=-3.87，P＜0.05]。⑵血清25-羥維生素D水平與BMI、DAS28評(píng)分、ESR、CRP呈負(fù)相關(guān)（r=-0.735、-0.539、-0.343、-0.539，P均＜0.01）；血清25-羥維生素D水平與Ts細(xì)胞呈正相關(guān)（r=0.636，P＜0.01）。⑶根據(jù)病情活動(dòng)度（DAS28評(píng)分）分組后，病情高活動(dòng)組（DAS28＞5.1）血清25-羥維生素D水平[(13.83±8.42)ng/ml]與ESR[(73.17±31.21)m

7、m/h]呈負(fù)相關(guān)（r=-0.381,P＜0.01）；血清25-羥維生素D水平[(13.83±8.42)ng/ml]與DAS28評(píng)分[(6.80±1.11)mm/h]呈負(fù)相關(guān)（r=-0.567,P＜0.01）。3組間血清25-羥維生素D水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=132.839，P＜0.01）。⑷根據(jù)不同BMI水平分組后，在超重組（BMI≥24 kg/m2），25-羥維生素D水平與ESR呈負(fù)相關(guān)（r=-0.395, P＜0.05）；在肥

8、胖組（BMI≥28 kg/m2），25-羥維生素D水平與ESR呈負(fù)相關(guān)（r=-0.385, P＜0.05）。3組間血清25-羥維生素D水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=31.41，P＜0.01）。⑸在抗-CCP陽(yáng)性組，25-羥維生素D水平與DAS28評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（r=-0.464,P＜0.01）?？?CCP陽(yáng)性組25-羥維生素D水平低于抗CCP陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-3.08，P＜0.01）。⑹實(shí)驗(yàn)組中，b組和c組分別加入不同的通路

9、抑制劑。b組與a組相比目的基因表達(dá)相對(duì)增加，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；c組和a組相比目的基因表達(dá)相對(duì)增加，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。⑺對(duì)照組中，陽(yáng)性對(duì)照組d組目的基因表達(dá)量比陰性對(duì)照組e組目的基因表達(dá)量相對(duì)增加，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。⑻在加入通路抑制劑實(shí)驗(yàn)組，b組（加入MEK-1抑制劑PD98059）與c組（加入 NF-κB抑制劑 parthenolide）目的基因相對(duì)表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0