RNA干擾靶向沉默IL-32γ基因?qū)︻愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞增值與凋亡的影響.pdf

1、目的：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoidarthritis,RA)是一種以滑膜炎和進(jìn)行性關(guān)節(jié)軟骨與骨質(zhì)破壞為主要特征的慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病。成纖維樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-likesynoviocytes,FLS)增生與凋亡失衡并分泌各種炎癥因子在RA免疫發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。白介素32(interleukin32,IL-32)是新近發(fā)現(xiàn)的一種致炎細(xì)胞因子,IL-32γ是IL-32所有亞型中生物學(xué)活性最強(qiáng)的。有研究發(fā)現(xiàn)其

2、與RA的啟動與進(jìn)展密切相關(guān),但它對RA-FLS生物學(xué)特性的影響尚不清楚。本實驗通過RNA干擾技術(shù)沉默IL-32γ基因研究IL-32γ對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)成纖維樣滑膜細(xì)胞(FLS)增殖與凋亡的影響及其機(jī)制。
　　方法：體外無菌條件下分離培養(yǎng)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的成纖維樣滑膜細(xì)胞(FLS);設(shè)計合成IL-32γ的靶向siRNA,用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染RA-FLS細(xì)胞;RT-PCR法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)IL-32γ的表達(dá);Western印跡法檢測周期

3、蛋白D1(cyclinD1)及蛋白激酶B(p-Akt)的表達(dá);MTT法檢測細(xì)胞增殖;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期;TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡。數(shù)據(jù)采用t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：①針對IL-32γ序列1、2和3的siRNA均能有效抑制FLS的IL-32γ的表達(dá)。②MTT法檢測實驗組在接種后3天和5天的細(xì)胞數(shù)量均明顯少于對照質(zhì)粒組和未轉(zhuǎn)染組。③實驗組處于G1期的細(xì)胞比例為(88.1±6.2)％,較對照質(zhì)粒組(68.6±4.6)%和未轉(zhuǎn)染

4、組(67.9±4.4)%顯著為高(均P<0.05);處于S+G2期的細(xì)胞比例為(13.6±3.0)%,較對照質(zhì)粒組(30.2±4.1)%和未轉(zhuǎn)染組(32.1±4.3)%顯著為低(均P<0.01)。④實驗組凋亡率為(20.5±3.21)%,較對照質(zhì)粒組(9.2±0.32)%和未轉(zhuǎn)染組(8.6±0.22)%顯著為高(均P<0.01)。⑤實驗組cyclinD1和p-Akt的表達(dá)明顯低于對照質(zhì)粒組和未轉(zhuǎn)染組。
　　結(jié)論：IL-32γ的靶向