miRNA-141與lncRNA-HOTAIR相互作用調(diào)控TGF-β2誘導膀胱癌細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機制研究.pdf

1、目的：
　　研究miRNA-141和lncRNA-HOTAIR在膀胱癌中的表達情況、相互作用機制及其通過調(diào)控TGF-β2對膀胱癌細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的影響，探討它們作為膀胱癌腫瘤標志物及基因治療靶點的可行性。
　　方法：
　　1、采用RT-QPCR法分別檢測比較8例非浸潤性膀胱癌組織和8例浸潤性膀胱癌組織中的miRNA-141和lncRNA-HOTAIR表達情況，并探討二者在膀胱癌組織中表達的相關性；
　

2、　2、在膀胱癌細胞株5637和EJ中上調(diào)或下調(diào)miRNA-141和lncRNA-HOTAIR表達水平后分別檢測其對相互之間的影響來探索它們之間調(diào)控的關系；
　　3、采用RT-QPCR法和Western Blot法分別檢測在膀胱癌細胞株5637和EJ中上調(diào)miRNA-141、下調(diào)lncRNA-HOTAIR及其相互作用對TGF-β2表達水平影響；在膀胱癌EJ細胞中上調(diào)miRNA-141表達后采用Western Blot法檢測其對膀胱癌

3、細胞EMT相關蛋白的影響，運用Transwell實驗、細胞劃痕實驗檢測其對膀胱癌細胞侵襲、遷移能力影響。
　　結(jié)果：
　　1、與非浸潤性膀胱癌組織相比較,浸潤性膀胱癌組織中miRNA-141表達水平下調(diào)77.89％,lncRNA-HOTAIR表達水平上調(diào)4.34倍，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；且miRNA-141和lncRNA-HOTAIR在膀胱癌中表達水平呈負相關,并且具有統(tǒng)計學意義（r=-0.66,P＜0.01

4、）；
　　2、miRNA-141 mimic或 inhibitor（實驗組）、miRNA-NC（陰性對照組）轉(zhuǎn)染膀胱癌細胞后，實驗組lncRNA-HOTAIR表達水平與control組相比表現(xiàn)下降或上升趨勢，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而NC組與control組相比無明顯變化，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；siRNA-HOTAIR（實驗組）、siRNA-NC（陰性對照組）轉(zhuǎn)染膀胱癌細胞后，實驗組miRNA-141表達

5、水平與control組相比表現(xiàn)上升趨勢，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而NC組與control組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；
　　3、miRNA-141 mimic轉(zhuǎn)染膀胱癌細胞5637和EJ后，TGF-β2表達水平出現(xiàn)下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；siRNA-HOTAIR轉(zhuǎn)染膀胱癌細胞5637和EJ后， TGF-β2表達水平出現(xiàn)下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；miRNA-141 inh

6、ibitor和miR-141 inhibitor+siRNA-HOTAIR分別轉(zhuǎn)染膀胱癌細胞5637和EJ后，與control組相比，miRNA-141 inhibitor增加TGF-β2的表達水平，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與miRNA-141 inhibitor組相比，miRNA-141 inhibitor+siRNA-HOTAIR組能夠抑制TGF-β2表達，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。miRNA-141 mimic轉(zhuǎn)

7、染膀胱癌細胞EJ后，Western blot法檢測EMT相關蛋白：與control組相比，Vimentin下降，E-cadherin上升，差別均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；Transwell實驗:EJ細胞的穿膜數(shù)目下降，與control組相比，差別具有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；細胞遷移實驗：EJ細胞遷移距離小于control組，差別具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、miRNA-141表達隨膀胱癌

8、組織惡性程度增高而降低，lncRNA-HOTAIR表達隨膀胱癌組織惡性程度增高而增高，它們可能在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用，是膀胱癌潛在的腫瘤標記物。
　　2、miRNA-141與lncRNA-HOTAIR在膀胱癌細胞中存在著相互抑制的作用，這使miRNA-lncRNA互相作用機制可成為膀胱癌基因調(diào)控研究的新方向。
　　3、miRNA-141和 lncRNA-HOTAIR相互作用調(diào)控著TGF-β2在膀胱癌細胞中的表達，從而影