lncRNA HOTAIR調(diào)控肝癌細(xì)胞自噬的機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　通過檢測lncRNA HOTAIR在肝癌組織中的表達(dá)情況并分析其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。研究HOTAIR對(duì)肝癌細(xì)胞自噬的影響并篩選出所調(diào)控的自噬相關(guān)基因。
　　方法:
　　1.收集2012年到2015年手術(shù)切除的54例肝癌及癌旁組織的標(biāo)本，所有肝癌標(biāo)本均經(jīng)病理確診為肝癌細(xì)胞肝癌。采用real-time RT-PCR檢測HOTAIR在54例肝癌癌組織與癌旁組織中的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。

2、
　　2.利用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)分別構(gòu)建HOTAIR高表達(dá)和低表達(dá)的肝癌細(xì)胞株，以空載質(zhì)粒為陰性對(duì)照組。利用real-time RT-PCR檢測HOTAIR轉(zhuǎn)染效率。通過westernblot、免疫熒光、透射電鏡等實(shí)驗(yàn)方法證實(shí)HOTAIR對(duì)肝癌細(xì)胞自噬的影響。
　　3.采用real-time RT-PCR篩選出HOTAIR高表達(dá)肝癌細(xì)胞株中自噬相關(guān)基因的表達(dá)變化。并通過western blot進(jìn)行進(jìn)一步證實(shí)。
　　結(jié)果:

3、r>　　1.肝癌組織中HOTAIR的表達(dá)水平高于癌旁組織，差異具有顯著性;HOTAIR的表達(dá)水平與腫瘤的大小有關(guān)，與其他臨床病理參數(shù)無關(guān);
　　2.western blot、免疫熒光、透射電鏡等試驗(yàn)結(jié)果均證實(shí)HOTAIR促進(jìn)肝癌細(xì)胞自噬的發(fā)生。其中HOTAIR細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率為15倍，阻斷效率為70％。
　　3.PCR和western blot結(jié)果顯示HOTAIR能夠明顯促進(jìn)Atg3和Atg7的表達(dá)。
　　結(jié)論: