溫度誘導(dǎo)煙粉虱DNA甲基化的特征和Dnmt1基因溫度耐受性功能的鑒定.pdf

1、煙粉虱MED隱種自入侵我國(guó)以來，迅速擴(kuò)散至我國(guó)大部分地區(qū)，其在短時(shí)間內(nèi)對(duì)不同地理環(huán)境的成功適應(yīng)顯示了其極強(qiáng)的生態(tài)適應(yīng)性。本研究著眼于煙粉虱入侵的生態(tài)適應(yīng)性機(jī)制，從溫度耐受性差異的生態(tài)學(xué)現(xiàn)象出發(fā)，從表觀遺傳學(xué)的角度，研究不同溫度脅迫處理下，煙粉虱入侵種MED隱種和本地種AsiaII3隱種各世代之間及雌雄之間的耐受性差異;在此基礎(chǔ)上采用F-MSAP技術(shù)，探討甲基化變化與溫度耐受性變化的關(guān)系;最后通過RACE技術(shù)克隆煙粉虱3個(gè)隱種的BtDnm

2、t1基因，并采用RNAi技術(shù)對(duì)該基因的溫度耐受性功能進(jìn)行了驗(yàn)證。主要結(jié)果與結(jié)論如下:
　　1.煙粉虱溫度脅迫耐受性具有可遺傳性:
　　(1)溫度脅迫耐受性至少可以遺傳1-3代;高溫對(duì)煙粉虱耐受性的影響大于低溫對(duì)耐受性的影響;耐熱性的改變幅度高于耐寒性的改變幅度;雌蟲的溫度耐受性的遺傳力高于雄蟲溫度耐受性的遺傳性;
　　(2) MED隱種對(duì)高溫脅迫耐受性改變幅度高于本地AsiaII3隱種:其中MED隱種的親一代(F1)的

3、耐熱性和子一代(F11)的耐寒性顯著高于AsiaII3隱種。
　　(3)不同產(chǎn)卵溫度脅迫對(duì)煙粉虱耐受性影響顯著:連續(xù)性溫度脅迫誘導(dǎo)的MED隱種耐受性的改變幅度均顯著高于非連續(xù)性的;且連續(xù)性脅迫誘導(dǎo)的MED隱種耐受性的改變?cè)谧哟芯哂懈叩倪z傳力。
　　2.煙粉虱溫度脅迫的耐受性與DNA甲基化變化密切相關(guān):
　　(1)MED隱種不同溫度脅迫處理組的不同世代的甲基化水平均低于AsiaII3隱種，但MED隱種總甲基化率均高于

4、其對(duì)照組;AsiaII3隱種甲基化水平均卻低于其對(duì)照組;
　　(2)MED隱種和AsiaII3隱種不同發(fā)育歷期的DNA甲基化水平和模式有差異;
　　(3)溫度脅迫下，卵期DNA甲基化水平顯著高于其它發(fā)育階段。連續(xù)性溫度脅迫卵的甲基化率升高幅度大于非連續(xù)性溫度脅迫。
　　3.克隆得到了煙粉虱MED、MEAM1和AsiaII3三個(gè)隱種Dnmt1基因的全長(zhǎng)cDNA序列:其推導(dǎo)氨基酸序列均具有Dnmt1蛋白的典型結(jié)構(gòu)，即N端調(diào)