高危型HPV感染、DNMT1表達(dá)和DAPK基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)在宮頸病變中相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：
　　 1.檢測(cè)宮頸病變細(xì)胞中DNMT1蛋白表達(dá)狀態(tài)和抑癌基因DAPK啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)，探討其在宮頸病變發(fā)生發(fā)展中的作用；
　　 2.探討高危型HPV的感染、DNMT1表達(dá)和DAPK啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)間的相互關(guān)系，可進(jìn)一步了解宮頸病變的發(fā)生機(jī)制，對(duì)該病早期篩查及病情發(fā)展的監(jiān)測(cè)提供幫助。
　　 方法：
　　 1.研究對(duì)象隨機(jī)選擇2011年1月至2011年12月我院婦科門診患者中均行TCT和陰道鏡檢

2、查的150例患者，根據(jù)陰道鏡宮頸活檢的病理診斷結(jié)果，分為子宮頸上皮內(nèi)瘤變I級(jí)(CINI)30例，子宮頸上皮內(nèi)瘤變II級(jí)(CINII)30例，子宮頸上皮內(nèi)瘤變III級(jí)(CIN111)30例，鱗狀細(xì)胞癌(SCC)30例作為研究組；另取未見惡性細(xì)胞和上皮內(nèi)病變細(xì)胞(NILM)30例為對(duì)照組。
　　 2.檢測(cè)高危型HPV-DNA感染情況取患者的TCT剩余標(biāo)本，提取DNA，SPR方法檢測(cè)高危型HPV，運(yùn)用生物傳感芯片閱讀儀讀取高危型HPV

3、-DNA感染情況。
　　 3.檢測(cè)DNMT1蛋白表達(dá)狀態(tài)取上述所選患者的TCT剩余標(biāo)本（保存期不超過3周），經(jīng)Thinprep2000系統(tǒng)重新制片1張，置于95％酒精中室溫固定24小時(shí)，空氣中晾干，置冰箱4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆脭M行DNMT1蛋白的免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。顯微鏡下觀察細(xì)胞圖片，細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞間質(zhì)出現(xiàn)棕褐色顆粒者為陽性。
　　 4.檢測(cè)抑癌基因DAPK啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)取入組患者的TCT剩余標(biāo)本，采用MSP技術(shù)，檢測(cè)患者宮頸

4、脫落細(xì)胞DAPK基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀況。攝像觀察8％PAGE上電泳結(jié)果：獲得甲基化產(chǎn)物，無論是否出現(xiàn)非甲基化產(chǎn)物，均判定為甲基化陽性；只出現(xiàn)非甲基化產(chǎn)物判定為甲基化陰性；甲基化產(chǎn)物與非甲基化產(chǎn)物均未獲得判定該標(biāo)本實(shí)驗(yàn)失敗。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS18.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1.150例宮頸各病變階段宮頸脫落細(xì)胞中高危型HPV-DNA的檢測(cè)情況：高危型HPV感

5、染陽性率為80.67％(121/150)，隨著病變程度的進(jìn)展，各組間高危型HPV感染率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（X2=30.658，Ph0.05），且呈現(xiàn)出增高的趨勢(shì)（趨勢(shì)X2=30.658，P＜0.05）。
　　 2.宮頸病變各階段DNMTI蛋白檢測(cè)結(jié)果：NILM組6.67％;CINI組56.67％;C!NII組63.33％;ciNⅢ組66.67％;SCC組76.67％。DNMTI蛋白在各宮頸病變階段組中的陽性表達(dá)率差異有顯著性(P＜0

6、.05)，且隨著病變程度的進(jìn)展，DNMT1蛋白表達(dá)率呈現(xiàn)出增高的趨勢(shì)(P＜0.05)。
　　 3.本實(shí)驗(yàn)中隨著病變程度的進(jìn)展，DAPK基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化率分別為3.33％、lO.OO％、13.33％、46.67％、60.00％，各組間有顯著性差異(P＜0.05)，且呈現(xiàn)出增高的趨勢(shì)(P＜0.05)。
　　 4.在宮頸病變的過程中，高危型HPV感染、DNMTI蛋白表達(dá)與DAPK基因甲基化兩兩間相關(guān)系數(shù)分別為0.3