非小細胞肺癌DNMT1與抑癌基因啟動子甲基化及表達的研究.pdf

1、目的：DNA甲基化是由DNA甲基轉移酶1催化（DNMT1）的一種表觀遺傳學上的 DNA修飾酶。本研究的目的是探討人非小細胞肺癌細胞株在離體及在體生長下DNMT1基因、蛋白的表達及其對抑癌基因甲基化狀態(tài)的影響。
　　方法：人肺鱗癌細胞株A549，H838在體外生長并種植于裸鼠皮下成瘤，兩種細胞株均使用DNA甲基轉移酶抑制劑（5-AZA-CdR）和/或組蛋白脫乙酰酶抑制劑（MS-275）進行治療治療，即分為四組：對照組、5-AZA-C

2、dR單獨治療組、MS-275單獨治療組及聯(lián)合治療組。表觀治療結束后，收集細胞，分別提取總DAN、蛋白及RNA。DNMT1及腫瘤抑癌基因（RASSF1A, ASC, APC, MGMT, CDH13,DAPK, ECAD, P16, GATA4等）蛋白水平的表達用Western blotting進行檢測；DNMT1及腫瘤抑癌基因轉錄水平的表達用RT-qPCR進行檢測；腫瘤抑癌基因（RASSF1A, ASC, APC, MGMT, CDH1

3、3,DAPK, ECAD, P16, GATA4等）啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)利用甲基化特異性PCR（MSP）進行檢測；細胞的生長使用CCK-8進行檢測。
　　結果：⑴經5-AZA-CdR和MS-275的表觀治療后非小細胞肺癌細胞 DNMT1基因 mRNA的表達降低。⑵在非小細胞肺癌細胞中5-AZA-CdR和MS-275的表觀遺傳學治療可抑制 DNMT1蛋白水平的表達。⑶在非小細胞肺癌細胞中表觀遺傳治療可導致抑癌基因發(fā)生去甲基化，從而使相

4、關抑癌基因恢復表達。⑷在非小細胞肺癌細胞中表觀遺傳治療可抑制其增殖。⑸在裸鼠體內，5-AZA-CdR及MS-275的表觀遺傳治療可明顯抑制腫瘤組織的生長。⑹在裸鼠體內，5-AZA-Cd及MS-275的表觀遺傳治療可使抑癌基因RASSF1A、ASC及APC發(fā)生去甲基化，從而恢復其表達。
　　結論：經DNA甲基化治療后隨著 DNMT1表達的降低，腫瘤抑癌基因的甲基化狀態(tài)受DNMT1基因的調控。在裸鼠，腫瘤抑癌基因的去甲基化抑制腫瘤組織