水產(chǎn)品中恩諾沙星膠體金快速檢測試紙條的研制.pdf

1、恩諾沙星是經(jīng)喹喏酮改造后的衍生物，并且抗菌能力強，作為一種廣譜高效的抗菌藥物。隨著氟喹諾酮類藥物在獸醫(yī)臨床和水產(chǎn)養(yǎng)殖中的廣泛應(yīng)用，其殘留的藥物會在動物體內(nèi)慢慢蓄積和積累，藥物殘留問題直接威脅到了人們的生命安全。目前，用于檢測恩諾沙星藥物殘留的常用方法為高效液相色譜法，雖然該方法靈敏度較高，但操作復(fù)雜、分析時間長且成本高，不利于現(xiàn)場檢測，滿足不了市場的需求。膠體金免疫層析試紙條“簡易、快捷、靈敏”是未來趨勢發(fā)展的主要檢測手段。
　　

2、本文通過研究影響恩諾沙星膠體金試紙條的多種因素，確定試紙條的制備流程和優(yōu)化條件，主要實驗結(jié)果如下:在100 mL0.01％的氯金酸中，加入2.0mL1％檸檬酸三鈉。采用磁力攪拌器加熱，煮沸反應(yīng)時間為10 min，轉(zhuǎn)速為200 r/min條件下，可以制備出優(yōu)質(zhì)的膠體金。根據(jù)膠體金粒徑經(jīng)驗公式，可以計算出膠體金的粒徑大約為14.60 nm左右。膠體金標(biāo)記抗體，蛋白最佳標(biāo)記量為9.6μg/mL，最適標(biāo)記pH為9.0。通過實驗對試紙條層析條件的

3、優(yōu)化，確定恩諾沙星抗原最適濃度為2.0 mg/mL，二抗最適濃度為0.5 mg/mL，金標(biāo)抗體最適稀釋倍數(shù)為4。金標(biāo)抗體最佳離心轉(zhuǎn)速為11000 r/min、重懸液為0.01 mol/L pH=9.0的硼酸緩沖液（含0.1％BSA、1％蔗糖）時，重懸效果較好，無掛壁、死金現(xiàn)象出現(xiàn);金標(biāo)抗體稀釋液為pH=7.4、0.01 mol/L PB、1％BSA含有5％的蔗糖和0.02％的疊氮鈉。對不同材質(zhì)材料的對比研究，最終選擇吸水墊型號為H507

4、2、NC膜型號為Millipore180、金標(biāo)墊選擇型號為Ahlstrom8964及樣品墊型號GL-b02。試紙條的性能檢測，試紙條的靈敏度為60 ng/mL;試紙條對ENR具有很好的特異性，環(huán)丙沙星、諾氟沙星、沙拉沙星及磺胺嘧啶、氯霉素對恩諾沙星免疫膠體金試紙條檢測均無明顯干擾;試紙條可在4℃下密封保存4個月，試紙條的穩(wěn)定性能較好。通過樣品前處理的優(yōu)化和實際樣品的檢測，能檢測出16μg/kg的陽性樣品，對恩諾沙星殘留的現(xiàn)場快速檢測具有