紫杉醇致體外培養(yǎng)犬乳腺腫瘤細胞凋亡形態(tài)學及抗氧化功能影響的研究.pdf

1、細胞凋亡發(fā)生于所有的腫瘤組織中，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉移密切相關?；熕幬镏饕ㄟ^誘導癌細胞凋亡達到治療效果，因此，誘導腫瘤細胞凋亡成為研究腫瘤治療的熱點。具有選擇性廣、毒副作用小，耐藥性低的天然藥物是中藥研究抗腫瘤的重要方向。紫杉醇是一種新型天然廣譜抗腫瘤藥物，其誘導凋亡的機制主要是通過抑制細胞有絲分裂，使細胞阻滯于G2/M期，從而阻斷正常的有絲分裂和細胞增殖。犬乳腺腫瘤是獸醫(yī)臨床常見的一種腫瘤性疾病，紫杉醇在犬乳腺腫瘤方面作用的研究

2、國內外尚無報道，并且犬與人類的關系密切，所處環(huán)境和致癌原因也極其相似，因此用犬來作為腫瘤的模型并對其進行研究，探討紫杉醇誘導動物腫瘤細胞的抗癌機制，對今后治療動物的腫瘤及人類癌癥治療方案的制定有著非常重要的意義。
　　 本課題以體外培養(yǎng)犬乳腺腫瘤細胞系CHMm株為模型，加入不同濃度的紫杉醇進行處理，于培養(yǎng)后24、48、72h分別對細胞增殖、細胞毒性作用和細胞形態(tài)學變化以及SOD、CAT、MDA等抗氧化功能因子進行測定，分析其作用

3、時間-劑量效應關系，探討紫杉醇誘導細胞凋亡的形態(tài)學變化及抗氧化功能的變化，為更進一步研究紫杉醇誘導犬乳腺腫瘤細胞凋亡機制以及為臨床應用紫杉醇治療癌癥提供更可靠的實驗數(shù)據(jù)。實驗結果表明：
　　 1．通過MTT比色法和臺盼蘭排斥實驗檢測了紫杉醇對犬乳腺腫瘤細胞生長的變化，結果表明隨著紫杉醇濃度增加，培養(yǎng)時間延長，抑制率逐漸上升，細胞活性逐漸下降，具有時間-劑量依賴性；通過乳酸脫氫酶活性的測定，結果顯示在同一時間點，不同濃度的紫杉醇組

4、間差異均極顯著（P<0.01）；在不同時間點，24h1μmol/L的紫杉醇與48h0.1μmol/L的紫杉醇與72h0.01μmol/L的紫杉醇比較不顯著（p>0.05），其他各組間比較差異均極顯著（P<0.01），表明紫杉醇能夠損傷犬乳腺腫瘤細胞胞膜的完整性，影響DNA和RNA合成，增加犬乳腺腫瘤細胞內的LDH漏出率，LDH活性增加，發(fā)揮細胞毒性作用，具有時間-濃度依賴性。
　　 2．應用倒置顯微鏡下觀察犬乳腺腫瘤細胞生長情況

5、；AO/EB雙熒光染色熒光顯微鏡下和透射電鏡下觀察犬乳腺腫瘤細胞凋亡的形態(tài)學變化。表現(xiàn)為對照組細胞完整，細胞分布均勻，內可見多個細胞核，核仁大而明顯，微絨毛和內質網豐富，染色質分布均勻；實驗組細胞質濃縮、染色質凝集、細胞膜表面微絨毛消失，胞質內有許多空泡樣變，凋亡小體形成，線粒體膜不完整，腫脹。結果表明紫杉醇可以誘導犬乳腺腫瘤細胞發(fā)生凋亡，并且隨著時間推移和藥物濃度的增加凋亡加劇。
　　 3．用不同濃度的紫杉醇作用于犬乳腺腫瘤細