PCV2對(duì)體外培養(yǎng)的仔豬淋巴細(xì)胞凋亡及抗氧化能力的影響.pdf

1、近年來(lái)，圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus2，PCV2)與發(fā)生的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)密切相關(guān)。該疾病的發(fā)生和蔓延已給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。此外，PCV2還與豬群中發(fā)生的其它疾病密切相關(guān)，包括PMWS、豬皮炎腎病綜合征、繁殖障礙、A2型先天性震顫、豬呼吸道病復(fù)合征以及豬增生性和壞死性肺炎等。已有的研究結(jié)果表明，P

2、CV2對(duì)免疫系統(tǒng)的影響較大，但尚不了解病毒在免疫系統(tǒng)間是怎樣發(fā)生作用的，也就無(wú)法說(shuō)明PCV2引起疾病的機(jī)理。本研究的目的是證實(shí)在體外PCV2與淋巴細(xì)胞之間的關(guān)系，并分析氧自由基在其中的作用。 實(shí)驗(yàn)選擇了4頭PCV2抗體陰性的普通斷奶仔豬，無(wú)菌摘除脾臟，鈍性分離淋巴細(xì)胞，分為兩組：對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組在培養(yǎng)體系中加入一定量的PCV2。分別在培養(yǎng)后不同時(shí)間，收獲淋巴細(xì)胞。用電子顯微鏡，DNA瓊脂糖凝膠電泳對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行定性測(cè)定，流

3、式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率進(jìn)行測(cè)定，并測(cè)定了凋亡相關(guān)蛋白CASPASE-3的表達(dá)情況。結(jié)果：PCV2作用后不同時(shí)間，DNA電泳均呈現(xiàn)出細(xì)胞凋亡特征性的梯形條帶；電鏡下出現(xiàn)細(xì)胞凋亡各期的形態(tài)學(xué)變化。細(xì)胞培養(yǎng)后0、2、4、6、12、24、36、48h，對(duì)照組的細(xì)胞凋亡百分率分別是：0.13±0.02、2.10±0.56、5.01±1.22、6.70±1.62、11.60±2.62、15.64±3181、30.19±4.1、37.08±4

4、.26，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡率分別為：0.134±0.02、3.334±0.66、15.46±3.21、17.764±3.41、23.21±4.62、27.884±4.98、41.234±5.45、49.534±6.55，兩組相比，從培養(yǎng)后4h開(kāi)始，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組；表明細(xì)胞增殖活性的增殖指數(shù)(proliferation index，PI)在培養(yǎng)后的各時(shí)間點(diǎn)，對(duì)照組分別是：38.53±4.39、29.28±3.71、29.1

5、3±3.41、24.88±4.65、17.88±3.63、12.97±1.70、12.43±2.66、10.04±0.35，實(shí)驗(yàn)組分別是：38.53±4.39、14.95±3.05、14.33±2.31、14.30±3.36、12.79±2.85、12.13±1.30、7.44±0.10、7.04±0.26。兩組相比，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組PI值均隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而下降，說(shuō)明體外培養(yǎng)對(duì)淋巴細(xì)胞的增殖有影響。兩組相比，Oh無(wú)差異(P>0.05)

6、，2、4、6、12、24h有顯著差異(P<0.05)，36、48h差異不顯著(P>0.05)，說(shuō)明PCV2在一定時(shí)間內(nèi)能抑制體外培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞的增殖。細(xì)胞凋亡的主要調(diào)節(jié)蛋白CASPASE一3的表達(dá)百分率，在培養(yǎng)后0、6、48 h，實(shí)驗(yàn)組分別為：2.12±0.69、7.75±0.93、17.42±3.70，對(duì)照組分別為：2.12±0.69、3.60±0.38、5.33±0.89，除Oh外，實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。 實(shí)

7、驗(yàn)結(jié)果表明，PCV2能引起體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞凋亡率增加，細(xì)胞增殖活性下降，且CASPASE-3是PCV2誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的重要調(diào)節(jié)物。為了進(jìn)一步了解PCV2引起淋巴細(xì)胞凋亡的機(jī)理，測(cè)定了PCV2對(duì)體外培養(yǎng)的仔豬淋巴細(xì)胞抗氧化能力的影響。淋巴細(xì)胞培養(yǎng)后不同時(shí)間的上清液，利用氧化還原反應(yīng)測(cè)定總抗氧化能力、黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)測(cè)定抗超氧陰離子自由基活性和超氧化物岐化酶活力的變化。結(jié)果，在淋巴細(xì)胞培養(yǎng)后0、2、6、24、48h，實(shí)驗(yàn)組總抗

8、氧化能力分別為：1.05±0.053 、1.82±0.188、3.89±0.109、4.65±0.242、6.03±0.188(U/ml)，對(duì)照組總抗氧化能力分別為：1.04±0.039、1.50±0.053、2.29±0.062、3.25±0.295、4.60±0.435(U/ml)，兩組相比，無(wú)顯著性差異(P>0.05)；抗超氧陰離子自由基活性實(shí)驗(yàn)組分別為：79.89±2.43、106.72±2.35、168.16±5.61、249

9、.41±4.88、471.93±4.23(U/L)，和對(duì)照組的70.12±1.18、95.02±3.05、133.61±2.32、202.24±6.29、261.44±3.47(U/L)相比，除了Oh，其它時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組總超氧化物岐化酶活力分別為：19.13±1.86、18.88±1.48、18.58±1.45、18.03±1.02、19.30±1.59和19.14±0.67、18.82±1