維生素A對奶牛乳腺硒蛋白合成及抗氧化功能影響機(jī)理的研究.pdf

1、本論文分5個部分，主要研究了維生素A(VA)對奶牛乳腺硒蛋白合成及抗氧化功能的影響機(jī)理。試驗1采用完全隨機(jī)試驗設(shè)計，按照體重、泌乳量及胎次相近的原則，將28頭奶牛分為2組，每組14頭。兩組試驗日糧分別在基礎(chǔ)日糧中按照110和220 IU/kg BW VA的標(biāo)準(zhǔn)來添加，以探討添加220 IU/kg BW的高劑量的VA對奶牛產(chǎn)奶性能、抗氧化及免疫功能的影響。試驗2采用體外法，采用完全隨機(jī)試驗設(shè)計，研究了不同濃度的VA（0，0.05，0.1，

2、0.2，1和2μg/mL）對奶牛乳腺上皮細(xì)胞(BMEC)硒蛋白合成及抗氧化功能的影響，篩選出了發(fā)揮較好抗氧化功能的VA作用劑量，并從硒蛋白合成、基因轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)水平探討了其可能的影響機(jī)理。試驗3利用過氧化氫(H2O2)作為刺激源，以細(xì)胞存活率及抗氧化指標(biāo)為判斷指標(biāo)，研究建立了BMEC的氧化損傷模型。在試驗3的基礎(chǔ)之上，試驗4分為對照組、H2O2損傷組、VA組和VA預(yù)防組，研究了VA對奶牛BMEC氧化損傷的保護(hù)作用。試驗5將BMEC隨機(jī)分

3、為對照組、DNCB抑制硫氧還蛋白還原酶(TrxR)組、VA組及VA+DNCB組四個處理組，從TrxR-MAPK信號通路-AA途徑探討了VA對奶牛乳腺抗氧化功能的影響機(jī)理。
　　本試驗研究初步得出以下結(jié)果:
　　(1)與添加110 IU/kg BWVA相比，日糧中添加高于NRC推薦劑量(220 IU/kgBW)的VA，對奶牛產(chǎn)奶性能無顯著的影響，但對抗氧化功能有顯著的促進(jìn)效果，可以顯著增加血清中硒蛋白谷胱甘肽過氧化物酶(GPx

4、)、TrxR活性及硒蛋白P(SelP)的含量，增加超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、總抗氧化酶(T-AOC)活性，降低丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)濃度。
　　(2)220 IU/kg BW VA可以顯著的增強(qiáng)奶牛的免疫功能，提高血清中免疫球蛋白M、免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、白介素1、腫瘤壞死因子、VA、可溶性CD4含量及sCD4/sCD8，降低sCD8含量和乳中體細(xì)胞數(shù)。
　　(3) VA的添加劑量對B

5、MEC增殖、抗氧化酶CAT、SOD和T-AOC活性、硒蛋白GPx和TrxR活性及SelP含量的上調(diào)作用呈顯著的劑量依賴關(guān)系，以1μg/mL的促進(jìn)作用較強(qiáng)，但添加劑量為2μg/mL時促進(jìn)效果有減弱的趨勢。VA可劑量依賴性的上調(diào)硒蛋白 GPx1 mRNA及其蛋白表達(dá)量，以1μg/mL時較好。VA也可上調(diào)TrxR1和SelP的mRNA表達(dá)量及TrxR1蛋白表達(dá)量，以1-2μg/mL時較強(qiáng)。綜合多項指標(biāo)，以1μg/mLVA劑量組的抗氧化效果較好

6、。
　　(4)600μmol/L H2O2作用細(xì)胞6h，BMEC的存活率降低至79.79％; GPx、SOD及CAT活性顯著下降，MDA含量顯著提高。說明H2O2作用濃度為600μmol/L，作用時間為6h，對BMEC產(chǎn)生了明顯的氧化應(yīng)激，可作為建立細(xì)胞氧化損傷模型的適宜劑量與作用時間。
　　(5)由H2O2誘導(dǎo)的BMEC氧化損傷引起了細(xì)胞存活率下降，硒蛋白GPx、TrxR活性和SelP含量、抗氧化酶CAT、SOD和T-AO

7、C活性、硒蛋白GPx1、TrxR1和SelP的基因表達(dá)和GPx1、TrxR1的蛋白表達(dá)降低，MDA和ROS含量升高;VA預(yù)防組抑制了上述指標(biāo)的相應(yīng)變化，保護(hù)了BMEC免受氧化應(yīng)激的損傷。
　　(6) H2O2誘導(dǎo)的BMEC氧化損傷顯著提高了花生四烯酸(ARA)的濃度、胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)的活性及其基因表達(dá)、5-脂氧化酶（5-LOX）的活性及其基因表達(dá)、15-羥基二十四碳四烯酸（15-HETE）和過氧羥基二十四碳四烯酸(1

8、5-HPETE)的產(chǎn)生;VA預(yù)處理組阻止了這些指標(biāo)的相應(yīng)變化，并提高了TrxR的活性。此外，VA預(yù)處理組可減緩氧化應(yīng)激導(dǎo)致的p38絲裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平的升高，有效地調(diào)節(jié)了ARA的代謝。提示VA對H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用可能與TrxR活性升高引起的ARA濃度降低有關(guān)。
　　(7) DNCB處理BMEC后，顯著抑制了細(xì)胞增殖、TrxR活性及其基因與蛋白表達(dá)量，提

9、高了cPLA2活性及其基因表達(dá)，引起ARA濃度升高;補(bǔ)加VA后，顯著減緩了這些指標(biāo)的變化，使得TrxR活性升高，ARA含量減少。
　　(8) DNCB處理BMEC后，細(xì)胞凋亡信號激酶活性顯著上升、MAPK信號通路中p38MAPK和JNK的磷酸化水平、ARA濃度及經(jīng)LOX代謝相關(guān)指標(biāo)5-LOX活性、LTB4、15-HPETE含量顯著升高;補(bǔ)加VA后，TrxR的活性增強(qiáng)，并顯著抑制了這些指標(biāo)的變化。
　　(9)從TrxR-MAP