36679.生長抑素基因工程天然及免疫鼠源單鏈抗體庫構建研究_第1頁
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1、華中農業(yè)大學碩士學位論文生長抑素基因工程天然及免疫鼠源單鏈抗體庫構建研究姓名：張穎申請學位級別：碩士專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖指導教師：楊利國龔炎長20080601華中農業(yè)大學2008年碩士學位論文AbstractPhagedisplayantibodylibrarytechnologyhasbeenwidelyusedinthediagnosisandtreatmentofdisease，andfunctionalproteinexpr

2、ession，whichgaveitabrightprospectinthedevelopmentofimmunoassaySomatostatin(SS)consistingof14aminoacidresidesisoneofthemostimportantneuropeptidessecretedfromhypothalamusnucleus，whichinhibitsthesecretionofgrowthhormone(GH)

3、andresultsindepressionofthegrowthandlactationSShasbeenconsideredakeyendocrinehormoneinphysiologicalregulationofanimalsproducedformeatandmilkpurposeTherefore，itisimportanttoestablishtheimmunoassaymethodsandtechniquesforst

4、udyonthegrowthregulationmechanism，andfordevelopmentofnewtechniquestopromotegrowthandlactationTherehavebeenfewreportsaboutmicromoleculesinglechainrecombinationmonoclonalantibodiesSOfarFurthermore，therehavebeenrieportsabou

5、tselectionofScFvsagainstsomatostatinbyphagedisplaytooSSwascoupledwithbovineserumalbium(BSA)toobtain觚artificialSSantigenwhichwasusedtoimmunizedmiceSpleenswereobtainedfrombothnon—immunizedandartificiallyimmunizedmiceanduse

6、dtoextractandpurifyRNArespectivelyTwosourcesofRNAwereusedtoamplifyantibodygenesforthenaturalandimmunelibraryrespectivelyTwoScFvlibrarieswereconstructedviaphagedisplaytechniquewithtwosourcesofRNAThemainresultsaleshownasfo

7、llows：1ImmunogensynthesisandanimalimmunizationThehaptensomatostatinwascoupledwithBSAtomakeacompleteantigenSSBSAbythecarbodiimideactivationTheBalb／cmicewereimmunizedwithSSBSAseveraltimesuntilthetiterofantibodiesreachedto1

8、／25602TheobtainningandsplicingofimmunoglobulinvariablegenesThecompleteRNAWasextractedfromspleencellsofnonimmunizedmiceandtheimmunizedmicewiththehighestantibodytitersUsingtheRTPCR，immunoglobulinvariableheavychainregiongen

9、es(Vii)andvariablelightchainregiongenes(VL)，whichwereabout360bpand340bprespectively，werefirstamplifiedTheapproximatelysamemoleofVHandVLgenespurifiedwerejointedtogetherthroughsplicingbyoverlapextension(SOE)，usingthefragme

10、ntscontainingpartsofthelinkerinimmunesinglechainantibodylibraryconstructionThesinglestrandDNAWasamplifiedviaasymmetryPCRfornaturalsinglechainantibodylibraryconstructionThesinglechainfragmentvariablegeneswereabout750bpgen

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