重組人干擾素α長效注射微球的研究.pdf

1、該課題設(shè)計采用體內(nèi)可生物降解的高分子材料聚乳酸羥基乙酸嵌段共聚物(PLGA)將IFN-α包被成微球,通過微球內(nèi)部的孔道以及高分子材料的融蝕降解來調(diào)控IFN-α在體內(nèi)外的釋放,以期達到一次給藥后4周持續(xù)釋放藥物的長效緩釋效果,從而提高用藥質(zhì)量和病人用藥的順應(yīng)性.課題工作首先研究了復(fù)乳法(w/o/w)制備IFN-α PLGA微球的制備工藝及其影響因素.通過單因素實驗設(shè)計考察了制備復(fù)乳時的攪拌速度、外水相聚乙烯醇(PVA)濃度、油相PLGA濃

2、度、內(nèi)水相滲透壓以及PLGA的平均分子量等因素對微球形態(tài)、平均粒徑和包封率的影響.結(jié)果表明制備復(fù)乳時的攪拌速度、PVA濃度、PLGA濃度、內(nèi)水相滲透壓和緩沖系統(tǒng)都對微球的外觀和粒徑有顯著影響.微球形態(tài)和粒徑是微球釋藥調(diào)控的重要因素,微球粒徑越小,突釋效應(yīng)越明顯.該試驗進一步研究了固體/油/油法(s/o/o)制備IFN-α PLGA微球的處方及制備工藝.試驗中首先制備了Zn<'2+>與IFN-α復(fù)合物,并證明了Zn<'2+>與IFN-α復(fù)

3、合物是一種可溶性沉淀,溶解后在電泳和凝膠色譜上的行為與IFN-α原液一致.根據(jù)文獻報道采用相凝聚法成功地制備了IFN-α及其Zn<'2+>復(fù)合物的微粉,并將其包被成微球.通過單因素實驗考察了PLGA濃度、攪拌速度、IFN微粉粒徑、油相中的添加劑等因素對微球粒徑、外觀以及包封率的影響.試驗中發(fā)現(xiàn)PLGA濃度、攪拌速度以及甘露醇等添加劑對微球粒徑和外觀影響顯著.由于蛋白質(zhì)在外油相中不溶解,因而包封率通常較高(90﹪以上.)IFN-α經(jīng)Zn<

4、'2+>處理形成復(fù)合物、油相中加入甘露醇、伯洛沙姆188(F-68)等添加劑則可顯著地改變微球的釋藥特性,尤其對突釋效應(yīng)影響顯著.以BCA(Bicinchoninic acid,二喹啉甲酸)分析法測定了釋放介質(zhì)中IFN-α的濃度,考察了微球的體外釋放特性.體外釋放試驗表明微球具有顯著的長效作用,可以緩慢釋放藥物30天左右.用二二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、分子排阻色譜以及細胞病變抑制法(CPE)等方法考察了制備工

5、藝和釋放過程中IFN-α的穩(wěn)定性.試驗表明IFN-α溶液在37℃條件下放置一個月可形成少量聚集產(chǎn)物和降解產(chǎn)物.復(fù)乳法制備工藝對IFN-α的穩(wěn)定性影響較小,微球中的IFN-α比活性較高,但在微球的體外釋放過程中IFN-α的比活性明顯下降.用s/o/o法制備的IFN-α和Zn<'2+>復(fù)合物微球中的IFN-α比活性較低,SDS-PAGE試驗也表明微球中的復(fù)合物用EDTA溶解后仍有少量二聚體產(chǎn)生,可能與IFN和Zn<'2+>復(fù)合物本身溶解性較