核苷(酸)類似物抗病毒治療的病毒免疫動(dòng)力學(xué)及其對(duì)療效的影響.pdf

1、研究目的：
　　 1.動(dòng)態(tài)觀察阿德福韋酯治療HBeAg陽(yáng)性的慢性乙型病毒性肝炎患者,伴隨病毒下降的過(guò)程,外周血特異性(HBV特異性CD4+T細(xì)胞功能)和非特異性免疫細(xì)胞(Treg細(xì)胞以及NK細(xì)胞受體NKG2D表達(dá))的改變,與HBeAg血清學(xué)應(yīng)答的相關(guān)性。進(jìn)一步探討病毒動(dòng)力學(xué)下降對(duì)宿主免疫功能的影響及抗病毒治療的病毒免疫學(xué)機(jī)制。
　　 2.比較抗病毒治療的病毒動(dòng)力學(xué)早期階段(0-12周),肝臟局部病毒的清除動(dòng)力學(xué)和肝組織免

2、疫細(xì)胞的改變,對(duì)HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換的影響。進(jìn)一步探討肝臟局部抗病毒治療的病毒免疫學(xué)機(jī)制。
　　 研究方法：
　　 入選13例HBeAg陽(yáng)性CHB初治患者,所有患者均予阿德福韋酯治療10mg/天,隨訪治療1年。在治療前、治療后2周、4周、8周、12周、16周、20周、24周、36周、48周留取肝素抗凝全血作為隨訪檢測(cè)標(biāo)本,部分全血分離外周血單核細(xì)胞凍存,分批進(jìn)行檢測(cè)。其中8例患者治療前和治療后12周各行肝活檢一次,留取肝

3、組織樣本進(jìn)行檢測(cè)。
　　 1.監(jiān)測(cè)抗病毒治療過(guò)程血清HBV-DNA、HBeAg、HBsAg的水平,BrdU淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)檢測(cè)相應(yīng)隨訪時(shí)間點(diǎn)的T細(xì)胞增殖率,酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)分泌干擾素-γ的HBV特異性CD4+T細(xì)胞頻數(shù),以評(píng)價(jià)抗病毒治療后病毒的下降對(duì)HBV特異性T細(xì)胞功能的影響。
　　 2.多色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)抗病毒治療過(guò)程,CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量和NK細(xì)胞活化受體NKG2D的表達(dá)。
　　 3.實(shí)時(shí)

4、熒光定量PCR檢測(cè)治療前和治療后12周肝臟組織病毒(cccDNA、HBVDNA)載量,比較治療前后肝臟組織病毒載量的動(dòng)態(tài)改變。
　　 4.免疫組化法分析治療前和治療后12周肝臟組織免疫細(xì)胞(CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞)和細(xì)胞因子干擾素-γ的動(dòng)態(tài)表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.阿德福韋酯治療48周時(shí),13例患者有9例HBVDNA陰轉(zhuǎn)(9/13,69％)；4例出現(xiàn)HBeAg的陰轉(zhuǎn)(4/13,30％),其

5、中2例出現(xiàn)Anti-HBe(2/13,15％)。治療36周和48周時(shí),HBeAg陰轉(zhuǎn)的患者血清HBVDNA下降較未陰轉(zhuǎn)的顯著(P<0.05)。
　　 2.伴隨病毒載量的下降,HBeAg陰轉(zhuǎn)組治療后HBV抗原特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答較治療前增強(qiáng),分別在治療12周和出現(xiàn)HBeAg陰轉(zhuǎn)時(shí)達(dá)到峰值(P<0.05),而HBeAg未陰轉(zhuǎn)組治療后較治療前無(wú)顯著增強(qiáng)。與HBeAg未陰轉(zhuǎn)組比較,在治療前和治療后各隨訪點(diǎn),HBeAg陰轉(zhuǎn)組HBV抗原

6、特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答都較前者顯著增強(qiáng)(P<0.05)。HBeAg陰轉(zhuǎn)組治療后HBV抗原特異性T細(xì)胞增殖能力一過(guò)性增強(qiáng),而HBeAg未陰轉(zhuǎn)組無(wú)T細(xì)胞增殖應(yīng)答。表明病毒載量下降后,部分患者出現(xiàn)HBV特異性T細(xì)胞應(yīng)答功能的增強(qiáng),并實(shí)現(xiàn)了HBeAg血清學(xué)應(yīng)答。
　　 3.伴隨血清HBV-DNA的下降,Treg的數(shù)量逐漸下降,4周后趨于穩(wěn)態(tài)；而NK細(xì)胞活化受體NKG2D在治療后8周開(kāi)始上升,48周時(shí)達(dá)到峰值(P=0.000)。HBV-

7、DNA和Keg之間呈正相關(guān)性趨勢(shì)(r=0.808,P=0.000),與NKG2D間呈負(fù)性相關(guān)趨勢(shì)(r=-0.734,P=0.000)；Treg的數(shù)量和NKG2D的表達(dá)趨勢(shì)和升降幅度在HBeAg轉(zhuǎn)換組和HBeAg未轉(zhuǎn)換組間沒(méi)有顯著差異。
　　 4.ADV治療12周后肝組織總HBVDNA平均下降1.52log10,肝組織cccDNA下降1.92log10；近98％左右的肝臟病毒量在治療的早期被清除。同步比較外周血HBVDNA平均降低

8、99.72％,肝臟局部和外周血病毒的清除動(dòng)力學(xué)相一致。
　　 5.治療前HBeAg陰轉(zhuǎn)組的肝組織HBV DNA和cccDNA水平低于HBeAg未陰轉(zhuǎn)組。同時(shí),治療12周時(shí)HBeAg陰轉(zhuǎn)組的cccDNA水平低于HBeAg未陰轉(zhuǎn)組。
　　 6.有4例患者治療12周后肝組織CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的平均陽(yáng)性面積和匯管區(qū)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較治療前增加,其中3例是HBeAg陰轉(zhuǎn)的患者,僅1例是HBeAg未陰轉(zhuǎn)患者。這提示治療后肝組織免疫效

9、應(yīng)細(xì)胞的增加,可促使抗病毒免疫功能的恢復(fù),有利于HBeAg的轉(zhuǎn)換。
　　 結(jié)論：
　　 1.阿德福韋酯抗病毒治療的病毒動(dòng)力學(xué),早期是藥物的抑制作用,后期免疫功能的恢復(fù)促使病毒的進(jìn)一步清除。外周血與肝臟的病毒清除動(dòng)力學(xué)是一致的。36周血清HBVDNA陰轉(zhuǎn)與HBeAg轉(zhuǎn)換密切相關(guān),是阿德福韋酯治療CHB患者HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換的預(yù)測(cè)因素。
　　 2.阿德福韋酯抗病毒治療過(guò)程,病毒負(fù)荷下降,外周血和肝臟局部特異性和非特