大豆葉綠體轉(zhuǎn)化載體pJY系列的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、雜交大豆是我國具自主知識產(chǎn)權(quán)的科研成果，具有廣闊的應用前景。為解決雜交大豆制種過程中不育系易與保持系混雜的問題，本文開展了大豆葉綠體轉(zhuǎn)基因的研究，目的是通過轉(zhuǎn)基因的方法在不育系的細胞質(zhì)中，植入篩選標記基因，以區(qū)分不育系和保持系。 根據(jù)已發(fā)表的大豆葉綠體序列(GenBankX07675)設計引物，用PCR方法獲得兩段大豆葉綠體同源重組序列LHRR和RHRR，克隆到質(zhì)粒pUC19中，并將來源于質(zhì)粒pTF102的壯觀霉素抗性基因aad

2、A克隆到兩段同源重組序列之間，以構(gòu)建大豆葉綠體轉(zhuǎn)化表達載體pJY01。aadA基因的啟動子Prm和終止子psbA基因序列，分別從煙草葉綠體基因組中擴增而來。在此基礎上，本文還將草丁膦抗性基因和綠色熒光蛋白與GUS的融合蛋白基因分別克隆到該載體上，得到pJY03和pJY04，并初步應用于煙草的葉綠體轉(zhuǎn)化，獲得了具壯觀霉素抗性的綠色愈傷和幼苗，PCR檢測出aadA基因的條帶，并在激光共聚焦掃描下檢測到GFP的表達，由此證實了這一實驗思路的可

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