系統(tǒng)性硬化癥患者骨髓間充質(zhì)干細胞的生物學特性.pdf

1、研究目的
　　 建立SSc患者骨髓間充質(zhì)干細胞（MSC）體外分離擴增的方法，并初步研究SSc患者骨髓MSC的一般生物學特性和免疫調(diào)節(jié)功能。
　　 研究方法：通過密度梯度離心和貼壁篩選法從SSc患者和對照骨髓中分離MSC，從形態(tài)、表面標志和多向分化潛能等方面進行鑒定，通過描繪生長曲線，流式細胞術PI染色檢測細胞周期研究其生長特性。通過混合淋巴細胞反應和淋巴母細胞轉化實驗研究SSc患者MSC的免疫調(diào)節(jié)功能，用RT-PCR方法

2、檢測MSC免疫相關因子的表達。
　　 研究結果
　　 1.通過密度梯度離心和貼壁篩選法從骨髓中分離出紡綞狀形態(tài)均一的MSC，SSc患者骨髓MSC擴增能力有限，傳代6次以后逐漸衰老。
　　 2.流式細胞術檢測MSC表面標志：CD34、CD45、CD31、CD83、CD80、HLA-DK（-），CD166、CD73、CD105、CD90、HLA-ABC（+），SSc患者MSC表型與對照無明顯差異，與培養(yǎng)條件有關。經(jīng)分

3、選的細胞純度達90％以上。
　　 3.流式檢測細胞周期顯示：SSc患者骨髓MSC90％以上處于G0/G1期，在傳代過程中無明顯改變，與對照無明顯差異，符合干細胞的特性。
　　 4.SSc患者和對照MSC在特定誘導條件下均能分化為骨、脂肪等間質(zhì)細胞。一些SSc患者表現(xiàn)出更強的成骨分化傾向。
　　 5.SSc患者和對照MSC在一定條件下均能輕度刺激異基因T細胞增殖，而抑制有絲分裂原引起的T細胞增殖，呈劑量依賴性，隨M

4、SC濃度增加而明顯。
　　 6.SSc患者MSC在mRNA水平表達免疫調(diào)節(jié)相關因子，觀察到部分患者MSC的巨噬系集落刺激因子（M-CSF）和轉化生長因子β1（TGF-β1）表達水平有所降低。
　　 研究結論
　　 1.SSc患者骨髓中能分離擴增出純度較高的MSC，體外可傳代6次以上，傳代過程中能保持干細胞的生物學特性。
　　 2.SSc患者骨髓MSC具有多向分化潛能，部分患者表現(xiàn)出成骨分化傾向。