金黃桿菌來源的角蛋白酶的分離純化和酶學性質研究.pdf

1、Chryseobacterium sp.具有產(chǎn)高活性角蛋白酶的能力。本文從其發(fā)酵產(chǎn)物出發(fā),經(jīng)過硫酸銨分級鹽析,Q-SepharoseTM Fast Flow柱層析,Sephadex G-75凝膠柱層析,純化產(chǎn)物可以在SDS-PAGE上得到單一條帶,經(jīng)檢測具有角蛋白酶活性,確定為角蛋白酶。 該角蛋白酶分子量為30 kDa左右,最適作用溫度為40℃,在30℃,40℃和50℃條件下,角蛋白酶具有較好的穩(wěn)定性。最適合作用pH值為8,最適

2、緩沖液為Tris-HCl緩沖液,并且在pH7-9范圍內角蛋白酶比較穩(wěn)定。Ca2+,Mg2+,K+等對角蛋白酶具有強烈的激活作用,而Fe3+,Co2+,Zn2+,Cu2+等離子可以抑制角蛋白酶的活性。PMSF強烈抑制角蛋白酶的活性,說明該角蛋白酶屬于絲氨酸蛋白酶家族,EDTA也能起到部分抑制作用,推測某些金屬離子在該角蛋白酶穩(wěn)定性方面起到重要作用。5％的甘油濃度促進角蛋白酶的活性,而乙醇則起到抑制作用。 酶促進反應動力學實驗表明該

3、角蛋白酶可以降解一系列角蛋白底物(如羽毛,羊毛,頭發(fā),Azure Keratin),Lineweaver-Burk作圖曲線表明：在以羊毛作為底物時,Km和Vmax分別為17.5mg/ml和2500(1000·A280/ml/min)。另外,該角蛋白酶對酪蛋白和偶氮酪蛋白具有強烈的水解作用。 考察了該角蛋白酶對羊毛織物的生態(tài)防氈縮效果。其中選用了諾維信公司產(chǎn)的Savinase 16L和Ajinomoto公司的Transglutam