大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)的生物學(xué)特性.pdf

1、目的：骨創(chuàng)傷后的再生能力提示有能夠自我復(fù)制并能多向分化的干細(xì)胞存在。一般認(rèn)為，干細(xì)胞存在于骨、骨膜、骨髓及其他由中胚層發(fā)育來的組織中，在出生后仍然有少量干細(xì)胞繼續(xù)存在，在機(jī)體損傷時參與組織的修復(fù)。組織工程的基礎(chǔ)是有功能的細(xì)胞，骨組織工程需要大量的成骨細(xì)胞。十多年來，國內(nèi)外學(xué)者和臨床工作者對各種組織的細(xì)胞成骨能力進(jìn)行了大量的研究，提出了定向性骨祖細(xì)胞、誘導(dǎo)性骨祖細(xì)胞和基質(zhì)干細(xì)胞的概念。目前，在研究中使用的作為種子細(xì)胞的成骨細(xì)胞來源有以下幾

2、種：骨、軟骨、骨外膜、骨髓和骨外組織。越來越多的證據(jù)表明，骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)有多分化潛能，移植人體內(nèi)后可分化為骨、軟骨、肌肉、脂肪、血管內(nèi)皮、肝臟、神經(jīng)等多種細(xì)胞。能夠作為組織工程中不同細(xì)胞的來源：在體內(nèi)正常循環(huán)中能夠分布于多種組織和器官，可以用于細(xì)胞和基因治療。而且取材、分離培養(yǎng)、擴(kuò)增以及導(dǎo)入外源基因也相對方便。BMSC。通過抽取自體骨髓得到，對病人造成創(chuàng)傷較少，且無免疫排斥反應(yīng)。因此，BMSCs在實(shí)際應(yīng)用時將具有潛在的優(yōu)勢

3、。本試驗(yàn)?zāi)康氖墙⒁环N簡單有效的骨髓基質(zhì)細(xì)胞的體外培養(yǎng)及成骨誘導(dǎo)方法，并探討在體外培養(yǎng)中其增殖和分化的相互關(guān)系，總結(jié)骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)的生物學(xué)規(guī)律，為將來在體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增出大量的有成骨活性的細(xì)胞以滿足再造骨組織的需要提供了美好的前景。 方法：沖洗法獲取Weistar大鼠骨髓，用貼壁法分離提純骨髓基質(zhì)細(xì)胞(Bone Marrow Stromal cells BMSCs)，傳至第3代細(xì)胞后分組：1.分別用普通培養(yǎng)基和誘導(dǎo)培養(yǎng)

4、基(DMEM加入地米松10<'-7>mmol/L，β-甘油磷酸鈉10mmol/L，維生素C50mg/L)培養(yǎng)10天，每3天換液1次。繪制各自細(xì)胞生長曲線。2.分別用普通培養(yǎng)基和誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)15天，每3天換液1次，于第4、7、10、13、16天，檢測兩組的堿性磷酸酶表達(dá)量。3.以5×10<'4>/ml密度接種于6孔培養(yǎng)板各1板，各孔放置載玻片，分別加入基礎(chǔ)培養(yǎng)液和誘導(dǎo)培養(yǎng)液培養(yǎng)，每3天換液，20天后分別取出各自細(xì)胞爬片行Von koss