NO對線粒體磷酸鹽載體和線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔開放的調(diào)控作用.pdf

1、線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔（membrane permeability transition pore，MPTP）在線粒體控制的程序性死亡過程中起著至關(guān)重要的作用，對線粒體乃至細(xì)胞影響巨大。線粒體磷酸鹽載體（phosphate carrier，PiC）作為MPTP的重要組成部分，被認(rèn)為參與了MPTP的組成，但 PiC在線粒體通透性轉(zhuǎn)換中所發(fā)揮的作用還不是很明確。一氧化氮（NO）是一種可以調(diào)節(jié)植物生理功能與代謝反應(yīng)的生物活性小分子，它參與調(diào)節(jié)植

2、物代謝和果實的成熟與衰老過程，并可調(diào)控線粒體功能，在植物體內(nèi)具有不可替代的重要作用。目前對NO和線粒體之間作用的研究大多集中在NO與線粒體呼吸、線粒體蛋白氧化損傷等方面，對于采后果實細(xì)胞中線粒體MPTP開放的變化以及NO對線粒體MPTP開放的調(diào)控作用的研究鮮有報道。開展外源 NO對 PiC蛋白和MPTP影響的研究，有助于明確PiC蛋白在線粒體通透性轉(zhuǎn)換過程中的作用，以及NO對線粒體MPTP開放的調(diào)控機(jī)理，對于明確MPTP開放機(jī)制，維持良

3、好的果實品質(zhì)，延長果實采后貯藏期具有重要的意義。
　　從肥城桃果實中提取RNA，根據(jù)GenBank中已經(jīng)公布的其他植物的PiC的基因保守序列設(shè)計簡并引物，通過降落PCR、RACE、巢氏PCR等方法，克隆得到肥城桃果實PiC基因cDNA全長共1769 bp，開放閱讀框共有1116個堿基，編碼372個氨基酸，在GenBank中的登錄號為KP122948。疏水性預(yù)測PiC為疏水性蛋白；跨膜預(yù)測PiC為跨膜蛋白。氨基酸序列對比發(fā)現(xiàn)桃果實P

4、iC蛋白與其他植物PiC蛋白的氨基酸序列同源性較高；系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示，桃果實PiC蛋白氨基酸序列與蘋果、梅花的親緣關(guān)系最近。將構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒pET-30a-PiC導(dǎo)入大腸桿菌Transetta（DE3）進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，蛋白質(zhì)電泳顯示在39 kDa處出現(xiàn)目的條帶。使用鎳柱對重組蛋白進(jìn)行純化，用梯度透析的方法將重組蛋白復(fù)性。熒光定量PCR結(jié)果表明，NO處理顯著上調(diào)了貯藏期間PiC基因的表達(dá)。NO與PiC蛋白的熒光光譜顯示，NO可與PiC蛋白發(fā)生