高效液相色譜中溶質(zhì)擴(kuò)散的最小化.pdf

1、色譜分離小分子類溶質(zhì)時(shí)，分離度隨著柱長的增加而增加，但用色譜分離純化生物大分子時(shí)，根據(jù)短柱理論，分離度基本上與柱長無關(guān)，而且有時(shí)可以得出短柱的分離度較長柱好的情況，短柱分離時(shí)，擴(kuò)散較長柱小，研究小分子類溶質(zhì)在柱中的擴(kuò)散規(guī)律對于生物大分子的短色譜柱理論研究很重要。本文研究內(nèi)容包括三部分： 1.疏水短柱分離純化蛋白質(zhì) 用PEG-600型疏水填料裝填色譜柱，長柱裝填大顆粒(L-L)，短柱裝填小顆粒(S-S)，分離五種標(biāo)準(zhǔn)蛋白，

2、對比兩種色譜柱分離效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者都具有很好的分離度。由于(S-S)相比于(L-L)較小的傳質(zhì)擴(kuò)散，所以前者比后者的分離效果更好一些。 用1mm，2mm，5mm不同長度的色譜柱(S-S)分離標(biāo)準(zhǔn)蛋白，比較分離效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)柱長減小到僅1mm長時(shí)，仍然具有很好的分離效果。最后用2mm長的小顆粒PEG-600疏水色譜柱成功地分離純化重組人干擾素-γ，在10min左右時(shí)干擾素-γ被洗脫，目標(biāo)峰純度達(dá)到92％。 2.反相色譜

3、中分離小分子類溶質(zhì)的研究 用3cm，5cm，10cm，15cm，20cm，25cm六根不同長度的反相色譜柱，以甲醇-水為流動(dòng)相，在不同的流動(dòng)相流速和甲醇濃度時(shí)分離苯、甲苯、萘、聯(lián)苯四種溶質(zhì)，研究了等度洗脫時(shí)半峰寬與保留時(shí)間，流動(dòng)相流速、柱長之間的關(guān)系。經(jīng)作圖后發(fā)現(xiàn)：(1)半峰寬與保留時(shí)間的平方根之間存在線性關(guān)系；(2)甲醇濃度相同，流動(dòng)相流速不同時(shí)，半峰寬與流速倒數(shù)的平方根之間也存在線性關(guān)系；(3)洗脫劑濃度，流動(dòng)相流速相同時(shí)，

4、半峰寬與柱長的平方根均呈線性關(guān)系。 用發(fā)現(xiàn)的幾種線性關(guān)系分別對半峰寬進(jìn)行了預(yù)測。最后考察了線性方程的斜率與溶質(zhì)的結(jié)構(gòu)參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：(1)流動(dòng)相流速不同，甲醇濃度相同時(shí)，半峰寬與保留時(shí)間平方根之間的線性關(guān)系的斜率，對四種溶質(zhì)的范德華體積和范德華表面積作圖存在線性關(guān)系；(2)隨著甲醇濃度的變化，兩種作圖均收斂趨勢，并且計(jì)算出了平均收斂點(diǎn)坐標(biāo)。 3.理論部分 以隨機(jī)步進(jìn)模型為基礎(chǔ)，從理論上推導(dǎo)出了第二部分所