高效液相色譜中異常峰分析

1、異常峰分析異常峰分析異常的色譜峰指的是色譜圖中的無峰或出現(xiàn)負峰、寬峰、雙峰、肩峰、峰形不對稱等情況。異常峰是色譜實驗工作中最棘手的問題。這些峰嚴重影響色譜分析的結(jié)果。色譜圖中不可能有純正的高斯對稱峰輕微的拖尾是正常的這是由分離系統(tǒng)所決定的。在此僅對幾種異常峰進行分析。1.峰前或峰后有小峰的分析峰前或峰后有小峰的分析產(chǎn)生原因大致分為以下幾種情形(1)樣品不純?？筛淖儾煌牧鲃酉嗪蜕V柱對樣品進行分離比較選擇合適的分離條件。(2)分析柱或保

2、護柱柱頭塌陷。此情況較常見可更換分析柱或保護柱后對峰形進行比較。柱頭塌陷時往往所有的峰都會出現(xiàn)峰分裂。對色譜柱再生和清洗可以改善分離效果。前輩們總是會告訴我們，拖尾峰與柱子有關(guān)，可能是過載，稀釋樣品再做，或換新柱做。有時候托尾峰往往是有機性相近雜質(zhì)沒有分開，此時，可以優(yōu)化分析方法，或更換柱子試一試；也可能由于柱子使用時間太久柱效下降出現(xiàn)塌陷等原因；再有也會根樣品本身性質(zhì)有關(guān)，基團需要流動相中添加能與之結(jié)合優(yōu)化峰形的化學(xué)物質(zhì)，要根據(jù)具體情

3、況而定。4.色譜雙峰產(chǎn)生的可能及判斷和處理色譜雙峰產(chǎn)生的可能及判斷和處理液相上有一句經(jīng)典的話說得好“出兩個峰肯定不是一種物質(zhì)，出一個峰不一定是一種物質(zhì)”。而色譜雙峰指的是明是一種物質(zhì)，但在色譜圖中出現(xiàn)雙峰，而表明含二種物質(zhì)。我將這種情況分為四種原因。1）色譜柱色譜柱如果你分析樣品時發(fā)現(xiàn)每個色譜峰都雙峰出現(xiàn)（出峰越快，雙峰的可能性會減少），尤其采用單一純物質(zhì)時，可以肯定色譜柱出問題－柱頭受損或柱頭固定相變臟或流失。如果進樣量少，原來色譜柱

4、正常，色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰，不一定拖尾，這一般應(yīng)是柱頭受堵，將色譜柱反過來接，用流動相沖洗或酸洗或其它溶劑，將堵在柱頭的殘留物沖掉，再反過來，一般情況下就行了。當(dāng)然不反沖，正沖有時也會正常的。如果峰拖尾，雙峰強弱相差不大，柱頭固定相變臟或流失可能性更大，高頻紅外碳硫分析儀這是可以將進樣那頭擰開，將微孔濾片超聲，柱頭刮去一部分填料，重新填上新填料擰緊，不過這種活，需要一定技術(shù)，同時不能老干那種事，否則用不了幾次，色譜柱就會應(yīng)柱效

5、很低而報廢。2）溶劑極性及進樣量溶劑極性及進樣量許多HPLC分析者對此可能不以為然，一般的HPLC的書籍和文獻都不會提到這方面的內(nèi)容，而這確是雙峰產(chǎn)生的一個很重要的原因。目前HPLC分析多為反相色譜，流動相多為甲醇、乙腈、水，加各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動相相溶的溶劑溶解。最佳的溶解方法是用流動相溶解，但是很多情況是不一致的。當(dāng)用溶劑極性強度大的試劑，如純甲醇、純乙腈，純乙醇，而分析體系中以水為主，樣品進樣量大，如定量管為

6、20ul，此條件下完全可以肯定，單一的純物質(zhì)出雙峰，第二峰比第一峰?。看味疾惶粯樱?，且拖尾，保留時間會提前（相對進樣量少而言），將進樣量減少一半以上，峰型將變?yōu)檎?。這是樣品的溶劑與流動相極性相差太大，而流動相來不及將其稀釋達到平衡造成的。上面提到進樣量造成雙峰的一個原因，另一個原因是，進樣量不一定大，但絕對量很大，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色譜柱問題）。將樣品稀釋再進樣就可以了，這是由于進