高效液相色譜的日常使用和維護

1、高效液相色譜的日常使用和維護高效液相色譜的日常使用和維護高新科技與現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展，促進了以高效液相色譜（HPLC）為代表的復(fù)雜樣品的分離分析和分離純化儀器的飛速發(fā)展。HPLC以它定量分析結(jié)果準(zhǔn)確、分析周期短、分析范圍廣、分析檢測限低等優(yōu)勢，在食品添加劑、藥物成分分析等多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。高效液相色譜儀是一種高端檢測儀器，它精密快速，有效準(zhǔn)確檢測的同時就要求我們一定要嚴(yán)格正確使用儀器，定期科學(xué)有效地維護儀器，只有這樣儀器才能長久持

2、續(xù)有效使用。但是從目前實際使用情況看，與高效液相色譜儀的應(yīng)用及產(chǎn)品技術(shù)升級的發(fā)展速度相比，其使用和維護則相對比較滯后，從而造成對儀器的濫用和對耗材不必要的浪費。主要原因是由于對于儀器使用操作者的培訓(xùn)側(cè)重于儀器的初步使用，忽略了儀器的后續(xù)培訓(xùn)及維護操作學(xué)習(xí)；其實很多高效液相色譜都是國外進口儀器，英文版本軟件對于大多數(shù)理工科畢業(yè)的儀器操作者也是一個障礙。筆者根據(jù)自己的工作經(jīng)驗，以島津LC20AT液相色譜儀為例，闡述液相色譜儀在使用時應(yīng)注意的

3、幾個問題及日常使用后的儀器維護基本事項，并對儀器使用過程中容易遇到的問題進行分析，提出解決方法。1、高效液相色譜儀的組成、高效液相色譜儀的組成高效液相色譜儀主要是由輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器和色譜軟件數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。1.1輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)主要包括溶液貯器、在線脫氣裝置、高壓輸液泵、梯度洗脫裝置。溶液貯器用于存放符合HPLC要求的流動相。在線脫氣裝置主要功能是流動相在進入柱子前排除氣泡。高效液相色譜柱的填料顆粒較小，通過2

4、～5mm的色譜柱受到的流動阻力很大，因此需要通過高壓輸液泵抽取流動相輸送至色譜柱。高壓泵按輸液性能可分為恒壓泵和恒流泵兩種。按機械結(jié)構(gòu)又可分為液壓隔膜泵、氣動放大泵、螺旋注射泵和往復(fù)柱塞泵四種，前兩種為恒壓泵，后兩種為恒流泵。恒壓泵可以輸出穩(wěn)定不變的壓力。在一般的分析儀器中，由于系統(tǒng)阻力不變，恒壓亦可達(dá)到恒流的效果。但是當(dāng)系統(tǒng)阻力發(fā)生變化時，輸入壓力即使不變，流量卻可隨阻力而變化。恒流泵則無論系統(tǒng)阻力如何變化都可保證其流量基本不變。在色

5、譜實際操作中，系統(tǒng)阻力可能隨著運行時間的增加產(chǎn)生微小的改變，因此恒流泵比恒壓泵更優(yōu)越。然而在泵和柱系統(tǒng)所允許的最大壓力下操作時，恒壓泵較為安全方便。液泵。2.2對流動相的要求對流動相的要求液相色譜所用的流動相一般為低沸點有機溶劑與水或者緩沖溶液的混合物。為保證液相色譜儀器的正常使用，所有流動相必須是色譜級的，且經(jīng)過過濾雜質(zhì)、排除氣泡后裝入干凈的流動相貯存瓶中待用。2.2.1流動相的物理性能要求對分析物要有足夠的溶解能力，以利于提高檢驗的

6、靈敏度；流動相的黏度要小，以保證合適的柱降壓；流動相的沸點要低，以利于制備分離時樣品的回收；2.2.2流動相的溫度一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱最高使用溫度不超過60℃，以低于40℃為宜。溫度過高會加速鍵合相水解和硅膠的溶解，從而使填料性質(zhì)改變，柱塌陷，降低柱效。最低使用溫度不超過0℃。2.2.3流動相的過濾所有流動相在使用前都必須經(jīng)過0.45μm（或0.22μm）的有機相脂溶性和水相（水溶性）濾膜過濾，以除去雜質(zhì)微粒。2.2.4流動相的脫氣

7、液相色譜所用到的流動相必須預(yù)先脫氣，否則容易在系統(tǒng)內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響泵的工作，影響基線的穩(wěn)定性。此外，溶解在流動相中的氧還可能與樣品、流動相反應(yīng)。溶解氧能與某些有機溶劑（如甲醛、四氫呋喃）形成有紫外吸收的絡(luò)合物，提高背景吸收，會在梯度洗脫時造成基線漂移或形成鬼峰。常有的脫氣方法有以下四種：（1）在線真空脫氣法把真空脫氣裝置串聯(lián)到儲液系統(tǒng)中，并結(jié)合膜過濾器，使流動相在進入輸液泵前脫氣，此法效果較好，尤其適用于多元溶劑體系。（2）超聲波脫氣法