β-甘露聚糖酶活性基因探討及固定化研究.pdf

1、該論文對(duì)地衣芽孢桿菌β-甘露聚糖酶進(jìn)行了側(cè)鏈基團(tuán)專(zhuān)一性化學(xué)修飾和固定化研究.通過(guò)化學(xué)修飾動(dòng)力學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析以及底物保護(hù)下的修飾反應(yīng),進(jìn)一步表明,地衣芽孢桿菌β-甘露聚糖酶必需活性基團(tuán)中包含有蛋氨酸、色氨酸及組氨酸等殘基.在修飾劑濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于酶濃度的條件下,修飾反應(yīng)為擬一級(jí)反應(yīng),酶必需活性基團(tuán)中有一個(gè)蛋氨酸殘基、兩個(gè)色氨酸殘基、一個(gè)組氨酸殘基.對(duì)已知分子結(jié)構(gòu)的β-甘露聚糖酶(如T.reesei Man5A,T. fuscaMan5A,P.

2、cellulosa Man26A)進(jìn)行分析,表明地衣芽孢桿菌β-甘露聚糖酶分子的折疊結(jié)構(gòu)為典型的(βα)<,8->桶式結(jié)構(gòu),分子表面有一個(gè)裂縫狀凹槽的催化活性拓?fù)浣Y(jié)構(gòu),有兩個(gè)Glu殘基為催化活性基團(tuán),分別起到催化和親核試劑的作用;一個(gè)His殘基在催化過(guò)程中起識(shí)別調(diào)節(jié)作用;而參與酶催化過(guò)程的兩個(gè)Trp殘基中一個(gè)為催化位提供一個(gè)疏水性面,另一個(gè)起到調(diào)控底物結(jié)合的作用;而Met殘基可能起到穩(wěn)定化酶分子活性位環(huán)境的作用.在專(zhuān)一性化學(xué)修飾的研究基

3、礎(chǔ)上,對(duì)該酶進(jìn)行了固定化研究.與游離酶相比,固定化酶最適pH均向堿性方向偏移,酶活性最適溫度均變高,酶穩(wěn)定性(包括酸堿穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性、貯存和操作穩(wěn)定性)均得到提高.固定化酶酶促水解角豆膠半乳甘露聚糖和魔芋葡甘聚糖反應(yīng)動(dòng)力學(xué)遵循米氏動(dòng)力學(xué)方程.該文還探討了固定化酶連續(xù)酶解調(diào)控魔芋葡甘聚糖產(chǎn)物分子量的操作方式.最后結(jié)合β-甘露聚糖酶化學(xué)修飾與固定化的研究結(jié)果,分析了酶專(zhuān)一性化學(xué)修飾與酶固定化之間的關(guān)系,重點(diǎn)討論了專(zhuān)一性化學(xué)修飾對(duì)酶固定化研