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文檔簡介
1、以本研究實驗室保存的殼聚糖酶產(chǎn)生菌-煙曲霉CK(Aspergillus fumigatus,CK)作為出發(fā)菌株,通過紫外線和微波進行復合誘變處理,利用抗分解代謝培養(yǎng)基,篩選出一株發(fā)生基因組正突變的菌株,起始菌株的殼聚糖酶活是13.68U/mL,正突變株后UW-17殼聚糖酶活高達22.43U/mL,是起始菌株的1.6倍,且遺傳穩(wěn)定性良好。
分離純化煙曲霉的代謝產(chǎn)物-殼聚糖酶,通過比較有機溶劑沉淀法、鹽析沉淀法、等電點沉淀法,
2、確定利用等電點沉淀法結合有機溶劑沉淀法分離純化殼聚糖酶,在保持溶液的pH為7.5,乙醇體積分數(shù)為60%的時候,殼聚糖酶的酶活收率為92.1%,分離純化效果最好。
通過比較多種固定殼聚糖酶的方法,發(fā)現(xiàn)大部分固定化酶方法會出現(xiàn)酶活力回收率低、穩(wěn)定性不強、酶活下降快等缺點,最終以聚乙烯醇(PVA)復合凝膠作為載體,利用反復凍融法固定化殼聚糖酶,經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖酶經(jīng)過固定化以后,顯著提高了其機械強度和化學穩(wěn)定性,并且可以多次重復使
3、用。通過單因素試驗和中心組合設計響應面分析,確定了殼聚糖酶固定化的最佳條件:以10.88%聚乙烯醇(PVA)和1.07%海藻酸鈉復合凝膠為載體,置入-20℃冰箱,反復凍融18h,得到的固定化酶效果最好。并對游離的殼聚糖酶和固定化的酶的特性進行比較,經(jīng)固定化的酶,其機械性能和化學穩(wěn)定性都得到顯著提高,與游離酶相比,固定化酶的最適反應pH值由5.5降至5.0,最適反應溫度是由60℃升至65℃,其米氏常數(shù)由7.24mg/ml升至10.12mg
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