高含量磷脂酰膽堿制備方法研究.pdf

1、磷脂是生命活動(dòng)的基礎(chǔ)物質(zhì)，磷脂酰膽堿(PC)是磷脂中的主要有效成分，主要來源于大豆和蛋黃。PC有防止肝炎及脂肪肝，降低膽固醇，預(yù)防心血管疾病及抗癌等功能，被世界衛(wèi)生組織列為“九大長(zhǎng)壽食品之一”。隨著人民生活水平的提高，藥用級(jí)高純度PC的需求趨旺。由于我國(guó)制備技術(shù)研究開發(fā)滯后，高純度PC主要依賴于國(guó)外進(jìn)口，價(jià)格昂貴。因此，研究如何從大豆和蛋黃中提純PC非常必要。 本文主要圍繞以下三部分內(nèi)容展開工作：首先，全面深入地研究了以蛋黃粉或

2、大豆?jié)饪s磷脂為原料，粗提精制蛋黃磷脂酰膽堿(ePC)與大豆磷脂酰膽堿(sPC)的工藝過程，ePC和sPC質(zhì)量指標(biāo)符合醫(yī)藥級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，為產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。 ePC的制備分為溶劑浸取和吸附精制兩部分。研究了溶劑浸取蛋黃的工藝，采用單因素法和正交設(shè)計(jì)法考察浸取時(shí)間、溫度、乙醇濃度等對(duì)PC含量和收率的影響，提出了優(yōu)化操作條件。蛋黃粉中的中性油脂等用丙酮去除，得到含量為68.0％的粗磷脂，達(dá)到國(guó)家對(duì)粉末磷脂含量的要求，溶劑浸取總收率高達(dá)9

3、5.5％。在吸附精制階段，比較了不同孔徑分布的200～300目粗孔硅膠與80～120目、100～200目粗孔2號(hào)硅膠分離效果，確定后者為最佳吸附劑?；谖椒蛛x的共性，用TLC法初步選定流動(dòng)相體系為正己烷-異丙醇-水系統(tǒng)；在制備色譜柱上，以PE、PC的保留時(shí)間及分離度為指標(biāo)，調(diào)整得到流動(dòng)相最適配比為46：46：8。優(yōu)化溫度、流速、進(jìn)樣濃度和進(jìn)樣量等操作條件，得到純度高達(dá)94％的產(chǎn)品，收率為60.9％。 本文提出了直接以大豆?jié)饪s磷

4、脂為原料經(jīng)層析純化一步得到符合藥品級(jí)規(guī)格的PC的分離方法，與報(bào)道的溶劑浸提或超臨界CO2除雜后再經(jīng)層析分離的工藝相比，工藝路線簡(jiǎn)單，消耗低，更具工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。通過比較層析產(chǎn)品中PC含量、收率和流動(dòng)相的消耗，選用100～200目粗孔2號(hào)硅膠為固定相，流動(dòng)相為正己烷：異丙醇：水(46：46：7.4)，最適上載量為0.086gPC.(g硅膠)-1，產(chǎn)品純度高達(dá)85.5％，收率接近100％。 其次，采用靜態(tài)吸附法研究了ePC與sPC在粗

5、孔2號(hào)硅膠上的吸附平衡，測(cè)定了兩種溫度下的吸附等溫線，結(jié)果表明：ePC和sPC在粗孔2號(hào)硅膠上的吸附等溫線是優(yōu)惠型的。可用Freundlich和Langmuir模型擬合，且以Langmuir模型吻合得最好。進(jìn)一步運(yùn)用考慮軸向擴(kuò)散、液膜傳質(zhì)阻力和內(nèi)擴(kuò)散阻力的一般性傳質(zhì)模型描述ePC、sPC在硅膠固定床中的吸附過程。建立的數(shù)學(xué)模型能夠較好地模擬PC在硅膠固定床中的吸附過程，結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算得到液膜傳質(zhì)系數(shù)與孔擴(kuò)散系數(shù)。從傳質(zhì)動(dòng)力學(xué)角度討論了

6、流動(dòng)相流速、初始濃度和吸附溫度等因素對(duì)吸附穿透曲線的影響，對(duì)ePC、sPC的制備工藝放大及設(shè)計(jì)具有參考價(jià)值和指導(dǎo)作用。 最后，提出了一種分析磷脂含量的新方法。比較了UV、RI和ELSD三種檢測(cè)器在磷脂分析中的優(yōu)缺點(diǎn)，證明ELSD是最合適的磷脂分析檢測(cè)器。通過調(diào)整流動(dòng)相組成與流速，優(yōu)化ELSD參數(shù)，確定了磷脂分析的梯度洗脫程序。首次基線分離了10種磷脂組分，擬合了PE、PI、sPC、ePC、SM和LPC六種磷脂的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，分析