外文翻譯----關(guān)于柑橘青果病的兩種韌皮部桿菌的pcr檢測

1、 本科畢業(yè)論文（或設(shè)計(jì)）外文翻譯中文 中文 7100 字本科畢業(yè)論文 本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì) 設(shè)計(jì))外 文 翻 譯題 目 關(guān)于柑橘青果病的兩種韌皮部桿菌的 關(guān)于柑橘青果病的兩種韌皮部桿菌的 PCR 檢測 檢測本科畢業(yè)論文（或設(shè)計(jì)）外文翻譯21.1 植物材料長春花（薔薇屬）和甜橙（柑橘科） ，均受到亞洲菌系和非洲菌系的兩種不同病菌

2、 的感染，并體現(xiàn)初出早期的癥狀。這兩類植物，其中感染亞洲菌系的主要放置在白天30℃和晚上 25℃的溫室中；感染非洲菌系的放置在白天 25℃和晚上 20℃的溫室中；另 外健康的長春花和柑橘植物通過播種，在 25/ 20℃的溫室里生長獲得。1.2 提取植物中的 DNA使用默里和湯普生提出的常規(guī) CTAB（十六烷基三甲基溴化銨）法來抽提 DNA。 提取柑橘葉片研磨液，準(zhǔn)備 PCR。1.2.1 方法 1：取 0.5g 的葉片中脈，用刀片切成細(xì)小

3、的碎片放在一個(gè)碟狀的可使用的研缽中，加入 1ml 的 0.3M NaCl。研磨成漿液狀態(tài)，用注射器收集進(jìn)行 100g 的低速離心時(shí)，進(jìn)行離心。PCR 既可以直接在 10 折至 100 折的稀釋的懸浮液上完成，也可以在懸浮液以16000g 離心 5min 后形成的沉淀物和用 100ul 滅菌水的稀釋液上進(jìn)行。1.2.2 方法 2：取葉片中脈（大約 0.1g 至 0.3g） ，用刀片切成細(xì)小的碎片放在一個(gè)碟狀的可使用的研缽中，加入 1ml

4、的 TE 緩沖液（10mM Tris PH 8.0,400 mM EDTA,1%SDS）,另外加入0.25mg 蛋白酶 K。將研磨成漿液轉(zhuǎn)移到 Eppendorf 離心管中，在 65℃情況下孵化 2h。懸浮液 12000g 情況下離心 15min，混入 1ml 的引物 DNA 凈化樹脂。這樹脂轉(zhuǎn)變成圓柱 體，然后用 2ml 80%的異丙醇洗滌兩次，接著加入 50ul 熱水（80℃） ，1min 后，這個(gè)Eppendorf 離心管的圓狀物

5、在 16000g 情況下離心 30s。重復(fù)該步驟，取出 100ul 清液（導(dǎo)出液） ，取兩個(gè) 10ul 的導(dǎo)出液分別用作 PCR。2.PCR 擴(kuò)增反應(yīng)普通引物 Fd1 和 rP1 被用作常規(guī)的原核生物 16SrDNA 的擴(kuò)增；引物 OI2c 和 OI1，用為亞洲菌系（印度浦那品種）16SrDNA 的擴(kuò)增；引物 OA1 用作非洲菌系（南非的內(nèi)爾斯 普雷特品種）的 16SrDNA 的擴(kuò)增，引物 OI1 同樣可以用作擴(kuò)增非洲菌系，除了有三個(gè)基

6、本的變化。因而它們用來作韌皮部桿菌的 16sDNA 的特異性擴(kuò)增。PCR 反應(yīng)是在 50ul 的混合溶液中進(jìn)行的，其中含有 0.5μM 的底物、200μM 的三磷酸脫氧腺苷、78mM 的Tris-HCL（PH 8.8） 、2 mM MgCl2、17 mM (NH4)2SO4、10 mM β-巰基乙醇、0.05% W1 去垢劑、200μg/mlBSA（Gibco 公司生產(chǎn)）還有 2.5U 的 Taq 聚合酶（Gibco 公

7、司生 產(chǎn)） 。溫度循環(huán)器可以調(diào)成以下系列步驟來進(jìn)行 PCR：92℃ 30s、54℃ 30s 和 72℃ 60s，循環(huán) 35 次，以 fD1/rP1 為引物；92℃ 40s（變性）和 72℃ 90s（退火和延伸） ， 循環(huán) 35 次，以 OI2c/OI1, OI2c/OA1 或者 OI2c/OI1/OA1 為引物。擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，用8μL 反應(yīng)混合液在 0.7%的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳分析。 限制性內(nèi)切酶分析擴(kuò)增 限制性內(nèi)切酶分析