蘋(píng)果屬山定子mb.nramp1基因克隆及其功能的初步研究

1、分類號(hào)；密級(jí)：?jiǎn)挝淮a：1 0 0 1 9學(xué) 號(hào)：B 0 2 0 5 3≮媛巖≮夭等博士學(xué)位論文蘋(píng)果屬山定子M b ．n r a m p l 基因克隆及其功能的初步研究I s o l a t i o n a n d C h a r a c t e r i z a t i o no f M b ．n r m n p l G e n eh i M a ／u sb a d m a ㈧蛐研 究 生： 肖瀣堡指 導(dǎo) 教 師： 瑩捱漣熬攫合作指導(dǎo)教

2、師： 塑筮蓮熬援盜雪蝰熬授申請(qǐng)學(xué)位門(mén)類級(jí)別： 盤(pán)堂擅±專 業(yè) 名 稱： 墨拉堂研 究 方 向： 墨撾甕王生物堂所 在 學(xué) 院：盛堂盞壘塑掛盔堂隧二o o 五年六月I s o l a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f M b ．n r a m p lg e n ei nM a l u s b a c c a t a ( L ．) B o r k hX i a o

3、H a i h u a( I n s t i t u t ef o r H o r t i c u l t i r a lP l a n t s ，C h i n a A g r i c u l t u r eU n i v e r s i t y ，B e i j i n g1 0 0 0 9 4 ，C h i n a )A b s t r a c tG e n em e m b e r s o ft h eN r a m p f a

4、 m i l ye n c o d i n g o f i n t e g r a lm e m b r a n e p r o t e i n s ，a x ei n v o l v e di nm e t a li o n t r a n s p o r t i o n ，e s p e c i a l l y r e g u l a t i o n o f i r o n m e t a b o l i s m ．I n o r

5、d e r t o i s o l a t e t h e N r a m p l g e n e( N a t u r a l ‘r e s i s t a n c e —a s s o c i a t e dm a c r o p h a g ep r o t e i n l ) f r o mM a l u sb a c c a t a ( L ) B o r k h ，R T - P C Ru s i n gd e g e n

6、e r a t ep r i m e r sc o r r e s p o n d i n gt oc o n s e r v e dm o t i f so f N r a m p li np l a n t ，a n dc o m b i n e d w i t hR A C E ．A n d a f t e rt h a tf u r t h e rs t u d y o nf u n c t i o n a n ds u b c

7、 e l l u l a r l o c a l i z a t i o n w a sd e v e l o p e d i nm o d e l e u k a r y o n ?！痭 em a i n r e s u l t sa x ea sf o l l o w s ：1 ．A2 0 9 0b pe D N A f r a g m e n tw a sc l o n e d ，w h i c h c o n t a i n s

8、 a f u l l - l e n g t ho p e nr e a d i n gf l a m e o fN r a m p lg e n ei nM a l u s b a c c a t a ( L ) B o r l d a ．I te n c o d e s a p r e d i c t e dp o l y p e p t i d e o f5 5 1a m i n o a c i d sw i t ham o l

9、e c u l a rw e i g h t o f a b o u t5 9 ．仉【D a ．B e c a u s e t h i s g e n es h a r e d h i g hh o m o l o g yo fL e n r a m p l ．i t i sn o m i n a t e d a s M b ．n r a m p l ．I t sa c c e s s i o n n u m b e r i s A Y

10、 7 2 4 4 1 3 ．A l i g n m e n ta n a l y s i s s h o w e d t h a tM b ．N R A M P lh a sh i g h e rs i m i l a r i t y 州t hL c N R A M P l ( 6 6 ％i d e n t i t ya n d8 0 ％s i m i l Ⅱi t y ) t h a n 塒t hO s N R A M P I ( 6

11、 3 ％i d e n t i t ya n d6 8 ％s i m i l a r i t y ) a n dA t N R A M P lf 5 5 ％i d e n t i t ya n d5 8 ％s i m i l a r i t y ) ．T h e M b ．N R A M P l p r o t e i n c o n t a i n s a l l c o n s e r v e dd o m a i n so f N

12、 R A M P s n c h a s p u t a t i v e N - l i n k e dg l y c o s y l a t i o n s i t e s ，1 2t r a n s m e m b r a n ed o m a i n s f f M s ) a n daC o n s e n s u s T r a n s p o r t e rM o t i f ( C T M ) i n t h ef o u

13、 r t h i n t r a c e l l u l a r1 0 0 Db e t w e e n T M s Ⅷa n d Ⅸ．2 ．N r a m p lh a so n e s i n g l ec o p y i ng e n o m eo f M a l u s b a c c a t a ( L ) B o r k h ．E x p r e s s i o no f M b ．n r a m p lu n d e rn

14、 u t r i e n t - s u f f i c i e n tc o n d i t i o n si s v e r yl o wi nr o o t sa n dn o td e t e c t a b l e i ns h o o t s ．T h ee x p r e s s i o nl e v e l o fM b ．n r a m p l u n d e r F e - d e f i c i e n c y c

15、 o n d i t i o n i n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y i n r o o t s ．I n s h o o t s t h ee x p r e s s i o ni sd e t e c t a b l ea f t e r1 5 d a y s ’F e - d e f i c i e n c yt r e a t m e n t s ．3 ．M b ．n r a

16、m p lw a se x p r e s s e di n y e a s tm u t a n tD E Y l 4 5 3 ，w h i c hr e v e r s e d t h eg r o w t hd e f e c t o ni r o n 。d e p l e t e dm e d i a ．I tg r e w s i g n i f i c a n t l yb e t t e rt h a nt h et r

17、a n s g e n i cy e a s t w i t he m p t y v e c t o r ．G r o w t ho fM b ．n r a m p lt r a n s f o r m e d y e a s tc e l l sw a st h es a m ew i t h w i l d t y p ea t1 5 pM B P D S a n d r e t a r d e da t3 0 uM B P D