芽孢桿菌bacillussp.產(chǎn)脂肪酶條件的優(yōu)化及酶的純化、酶學(xué)特性的研究

1、福建師范大學(xué)碩士學(xué)位論文芽孢桿菌（Bacillus sp.）產(chǎn)脂肪酶條件的優(yōu)化及酶的純化、酶學(xué)特性的研究姓名：黃鷺強申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)及分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：謝必峰20040529芽孢桿菌( 肋c f 7 f w 夠) 產(chǎn)脂肪酶條件的優(yōu)化及酶的純化、酶學(xué)特性的研究A B S T R A C TL i p a s e sf r o m B a c i l l u ss h o wh i g h t h e r m o s t

2、a b i l i t yo f t h e i r l i p a s ea c t i v i t i e s ，s t a b i l i t i e so f w i d ap H r a n g e a n d g o o d o r g a n i cs o l v e n t t o l e r a n t ，w h i c h w e r e a p p l i e d i nb i o e a t a l y s i

3、sn o n a q u e o u s m e d i a a n d o p t i c a l l y a c t i v es u b s t a n c er e s o l u t i o nW e s t u d i e d a n e w i s o l a t e dw h i c h w a s c o n s e r v e d b yo B r i n s t i t u t e I tw a s i d e n

4、 t i f i e da sB a c i l l u s 艱b y p h y s i o l o g i c a l t e s ta n d b i o c h e m i c a l t e s t ．A u n i f o r m e x p e r i m e n t a ld e s i g n w a s u s e dt od e t e r m i n e o p t i m u m f e r m e n t a

5、 t i o n c o n d i t i o n sa n d m e d i u mc o m p o s i t i o n s i ns h a k ef l a s k c u l t i v a t i o n ．o p t i m i z a t i o nd a t aw e r ec a l c u l a t e d w i t hD P Ss e t h , r a r e —a i d T h e o p t

6、i m a l l i p a s e —p r o d u c i n g c o n d i t i o n so f B a c i l l u ss p ．w “e a sf o l l o w s ：07 8 ％c o r ns t a r c ha sb e s tc a r b o nS O U r C e ．4 ．0 ％s o y b e a n h i e a la sb e s tn i t r o g e nS 0

7、 1 ．f f C e a n dK 2 H P 0 4 0 4 ％，N a N 0 3 0 2 ％，i n i t i a l p H l 00 ，c u l t u r e t e m p e r a t u r ew a s3 2 “ C ，s h a r k f l a s k c a p a c i t yw a s 2 0 m l ，s t i r r i n gr a t ew a s 2 2 5 r ／m i n ，g

8、e r ma g e w a s2 4 h ．g e r m c o n c e n t r a t i o n w a s 】O ％a n d f e r m e n t a t i o np e r i o d s w a s 2 8 h ．T h e l i p a s ew a s p u r i f i e dt oh o m o g e n e i t y u s i n g a m m o n i u m s u l f

9、a t ep r e c i p i t a t i o n ，c a t i o n ．e x c h a n g ec h r o m a t o g r a p h y ( C M —S p e p h r o s e F F ) a n dS c p h a c r y lS - 2 0 0 ，a n d i t ss p e c i f i ca c t i v i t yw a s i m p r o v e d 9 ．4

10、5 一f o l dT h e m o l e c u l a r m a s sw a s s h o w n t ob e 3 20 8K D a b y S D S —P A G EP r o p e m e s o f t h e l i p a s es h e w e d ：1 T h e o p t i m u m t e m p e r a t u r ew a s 5 0 ℃I ts h o w s t h e r m

11、 o s t a b i l i t yu n d e r 5 0 ℃2 T h e o p t i m u m p H w a s 9 ．0 I t s h o w e d h i 【g } 1 a c t i v i t y i na p H r a n g e f r o m 7 ．0 t o 1 l O I3 T h e r e w a s n o t i n c r e a s e dt oe n z y m a t i c

12、a c t i Ⅵt yw i t hC ∥’，w h i c hi n d i c a t e dl i p a g ef r o m B a c i l l u ss p ．w a sn o t a C 擴+ d e p e n d e d l i p a s e4 N o n i o n i cd e t e r g e n t i n c r e a s e de n z y m a t i c a c t i v i t yw

13、 i t hl o w c o n c e n t r a t i o n , y e t i tw a sd e c r e a s e d w i t hh i 曲c o n c e n t r a t i o n l n o i c d e t e r g e n ts h o w e dv a r i e d d e c r e a s e de f f e c t st ot h el i p a s ew i t he i

14、t h e rh l g ho rl o w c o n c e n t r a t i o nI ti n d i c a t e dt h a tl i p a s e sf r o m B a c i l l u ss p w o u l d b ea p p l i e dw i d e l y ' a si t s h o w e dh i g ht h e l ' m o s t a b i l i t i