版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、脂肪酶在食品、藥品、洗滌劑、化妝品和生物柴油合成等領(lǐng)域擁有廣泛的用途,并且備受人們關(guān)注。發(fā)掘具有脂肪酶高產(chǎn)潛力的微生物資源及其基因資源并加以開發(fā)利用對(duì)脂肪酶的酶學(xué)研究和實(shí)際應(yīng)用具有重要的意義。
本文主要進(jìn)行了以下方面的研究:
(1)產(chǎn)脂肪酶菌株Serratia marcescens Lipa1318篩選和鑒定:采用吐溫平板與橄欖油油脂板結(jié)合的方法從采集自河北省各地油污豐富的122份土樣中初步篩選到57株脂肪酶產(chǎn)生菌。
2、用p-NPP法復(fù)篩獲得一株高產(chǎn)脂肪酶的菌株Lipa1318,酶活達(dá)到2.56U/mL。通過(guò)對(duì)該菌株的形態(tài)、培養(yǎng)特征及主要生理生化特征的鑒定確認(rèn)其是粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratiamarcescens);PCR擴(kuò)增得到該菌株1535 bp長(zhǎng)的16S rDNA保守序列,與NCBI公布的16S rDNA序列進(jìn)行比對(duì)分析,并通過(guò)MEGA4.1軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹最終確定該菌株為S.marcescens,故將該菌株命名為S.marcescens Li
3、pa1318。對(duì)菌株Lipa1318粗酶液的最適溫度、最適pH值及溫度和pH值穩(wěn)定性的研究結(jié)果表明該菌株脂肪酶的最適反應(yīng)溫度為60℃,最適pH為8.0,此條件下酶活為3.56 U/mL。該酶在50℃下保溫1h后酶活保持約90%;在pH值5.0~11.0之間,30℃保溫2.5 h后,酶活仍保持70%,說(shuō)明該酶是一種耐熱堿性脂肪酶,且具有良好的熱穩(wěn)定性及pH穩(wěn)定性。
(2)S.marcescens Lipa1318產(chǎn)脂肪酶發(fā)酵條件
4、優(yōu)化:通過(guò)單因子試驗(yàn)及響應(yīng)面設(shè)計(jì)軟件Design-Expert V8.0.6.1對(duì)菌株S.marcescens Lipa1318進(jìn)行產(chǎn)酶條件的優(yōu)化。結(jié)果顯示該菌株的最適產(chǎn)酶條件為:在含1.0%的牛肉膏、0.31%的葡萄糖、0.15%酵母粉、0.54% TritonⅩ-100、0.50 mmol/L Ca2+、初始pH8.0的發(fā)酵培養(yǎng)基中,按4%接種量接種于裝液量為60 mL的300 mL三角瓶中,30℃發(fā)酵培養(yǎng)96 h,最高酶活可達(dá)(1
5、3.95±0.07)U/mL。按照上述培養(yǎng)條件對(duì)菌株Lipa1318進(jìn)行10L發(fā)酵試驗(yàn),發(fā)酵液酶活力提高到25.32 U/mL,較搖瓶發(fā)酵的酶活提高了近2倍。
(3)S.marcescens Lipa1318脂肪酶基因的克隆和表達(dá):根據(jù)GenBank中已知的S.marcescens脂肪酶基因序列設(shè)計(jì)相應(yīng)引物,成功克隆了S.marcescens Lipa1318的脂肪酶基因并命名為lipA,GenBank登錄號(hào)為KJ669102
6、。lipA長(zhǎng)1845 bp,同源序列比對(duì)結(jié)果表明lipA基因與其他S.marcescens菌株公布的脂肪酶基因同源性高達(dá)94-99%; lipA基因編碼614個(gè)氨基酸,分子量為65 kDa,與其他S.marcescens菌株公布的脂肪酶至少有2個(gè)氨基酸的差異。通過(guò)軟件成功對(duì)該脂肪酶蛋白的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)該蛋白質(zhì)的中后段即第484-539個(gè)氨基酸殘基處為該蛋白的保守區(qū)。將lipA基因分別插入表達(dá)載體pET-21b及pET-
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 堿性脂肪酶高產(chǎn)誘變菌株產(chǎn)酶條件優(yōu)化及其堿性脂肪酶的高效分離純化.pdf
- 22712.產(chǎn)脂肪酶菌株的篩選、鑒定及產(chǎn)酶條件優(yōu)化
- 產(chǎn)低溫脂肪酶菌株發(fā)酵條件優(yōu)化及酶學(xué)性質(zhì)的初步研究.pdf
- 天然高產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌的分離鑒定及脂肪酶基因的分析
- 脂肪酶基因的克隆表達(dá)及其酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf
- 低溫脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選、鑒定及產(chǎn)酶條件優(yōu)化.pdf
- pseudomonassp.rt1低溫脂肪酶發(fā)酵條件優(yōu)化、純化及基因的克隆表達(dá)
- 脂肪酶工程菌發(fā)酵條件優(yōu)化及脂肪酶的定點(diǎn)突變.pdf
- 熒光假單胞菌26-2產(chǎn)脂肪酶條件優(yōu)化及其脂肪酶基因在畢赤酵母中的高效表達(dá).pdf
- 產(chǎn)堿性脂肪酶菌株Aspergillus awamori HB-03的篩選與鑒定及脂肪酶酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf
- 脂肪酶工程菌發(fā)酵條件優(yōu)化及脂肪酶的定點(diǎn)突變(1)
- 發(fā)酵法生產(chǎn)皺褶假絲酵母(Candida rugosa)脂肪酶:發(fā)酵條件的優(yōu)化和脂肪酶性質(zhì)的研究.pdf
- geotrichumsp.sybcwu3產(chǎn)脂肪酶發(fā)酵條件優(yōu)化及酶學(xué)性質(zhì)研究
- 30054.burkholderiamanasybcli1產(chǎn)脂肪酶發(fā)酵條件優(yōu)化及酶學(xué)性質(zhì)研究
- 脂肪酶產(chǎn)生菌的細(xì)胞融合選育及其產(chǎn)酶條件優(yōu)化.pdf
- 40115.霉菌脂肪酶基因的克隆與表達(dá)
- 油菜脂肪酶基因的克隆及表達(dá)研究.pdf
- 49155.堿性脂肪酶酵母菌的分離鑒定、誘變選育及其產(chǎn)酶條件的研究
- 堿性脂肪酶生產(chǎn)菌株的誘變選育、堿性脂肪酶的分離純化與固定化初探.pdf
- 脂肪酶產(chǎn)生菌的選育及其發(fā)酵條件的研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論